基于神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡的新風膠囊調(diào)控佐劑性關節(jié)炎大鼠心功能的機制研究.pdf

1、1.目的：
　　 以中醫(yī)理論為指導，從神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫(neuro-endocrine-immune，NEI)網(wǎng)絡角度總結分析類風濕關節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)心功能的變化及中藥對其影響；通過動物實驗，研究佐劑性關節(jié)炎(adjuvant arthritis，AA)大鼠心功能、NEI網(wǎng)絡指標的變化及健脾化濕通絡中藥新風膠囊(xinfeng capsule，XFC)對其的影響，并從NEI網(wǎng)絡角度揭示XF

2、C對從大鼠心功能的調(diào)控作用及其機制。
　　 2.方法：
　　 2.1理論研究
　　 通過文獻研究，總結分析NEI網(wǎng)絡與心功能、RA、中醫(yī)脾的關系；從中醫(yī)理論闡釋RA心功能改變的主要病機；并從NEI網(wǎng)絡角度闡述RA心功能改變機制及XFC對其調(diào)控的機制.
　　 2.2實驗研究
　　 將60只SD(sprague dawley，SD)雄性大鼠按隨機數(shù)字表分為5組：正常對照(normal control，

3、NC)組、模型對照(model control，MC)組、雷公藤多甙片(tripterygium wilfordii polyglycoside tablet，TPT)組、甲氨喋呤(methotrexate，MTX)組和XFC組，每組12只，除NC組外，將其余各組制備成從模型并于致炎后第19天開始給予相應藥物治療30天。實驗過程中觀察各組大鼠的一般體征、體質(zhì)量、足跖腫脹度、關節(jié)炎指數(shù)(arthritis index，AI)；實驗結束日檢

4、測大鼠心功能；隨后檢測大鼠NEI網(wǎng)絡各指標：采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA)檢測各組大鼠外周血中5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)、多巴胺(dopamine，DA)、腦鈉肽(brainnatrlureric peptide，BNP)、內(nèi)皮素-1(endothelin-1，ET-1)、降鈣素基因相關肽(calcitionin gene relat

5、ed peptide，CGRP)、白介素(inter leukin，IL)-6、IL-10、IL-17和腫瘤壞死因子-α(tumournecrosis factor alpha，TNF-α)水平，流式細胞術檢測大鼠血液CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞(reguLatory T cell，Treg)表達頻率，免疫組化法法檢測脾臟組織Foxp3蛋白的表達，逆轉錄-聚合酶鏈反應(reversetranscription polymerase c

6、hain reaction，RT-PCR)法檢測心臟組織BNPmRNA、脾臟組織Foxp3mRNA表達；并檢測大鼠心臟組織結構：采用HE染色和電鏡觀察大鼠心臟組織形態(tài)學改變，并采用免疫印跡(westernblotting，WB)和RT-PCR法檢測基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrixmetalloproteinase9，MMP9)和基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-1(tissueinCIbitor of matrix metalloprotein

7、ase-1，TIMP1)的表達水平。
　　 3.結果：
　　 3.1理論研究結果
　　 3.1.1 NEI網(wǎng)絡與隊心功能改變的密切相關
　　 NEI網(wǎng)絡中三大系統(tǒng)交互相扶相制維持機體的動態(tài)平衡。因此機體的任何病變都與NEI網(wǎng)絡密切相關。而RA心功能改變是RA疾病的進展，此疾病的進展過程與NEI網(wǎng)絡的密切相關。
　　 3.1.2中醫(yī)脾臟是調(diào)節(jié)NEI網(wǎng)絡的重要中樞，心與脾為母子關系，在生理功能和病理變

8、化上相互影響
　　 脾是藏象理論研究的核心部分，可以看作神經(jīng)、內(nèi)分泌、免疫等系統(tǒng)都有密切關系的功能集團。另外，脾屬土，心屬火，心與脾乃母子關系，若子病及母或子盜母氣，均可因脾之失調(diào)而波及于心。
　　 3.2實驗研究結果
　　 3.2.1 AA大鼠心功能改變
　　 與Nc組比較，MC組的心率(heart rate，HR)、心臟指數(shù)(cardiacindex，CI)、左室收縮末壓(left ventricul

9、ar end-systolic pressure，LVESP)、左室舒張末壓(left ventricular end-diastolic pressure，LVEDP)明顯升高(p<0.01或p<0.05)，左室內(nèi)壓上升/下降最大速率(themaximum change rate of left ventricular pressure rise and fall，±dp/dtmax)明顯下降(P<0.05)。
　　 3.2.

10、2 AA大鼠NEI網(wǎng)絡改變
　　 與NC組比較，MC組TNF-α、BNP、IL-17、5-HT、ET-1、IL-6、DA顯著升高，CGRP、IL-10、CD4+CD25+Treg、Foxp3顯著降低(P<0.05或P<0.01)。
　　 NEI網(wǎng)絡指標的分層聚類分析結果表明：全部檢測指標分為兩大類，TNF-α、5-HT、BNPmRNA、CGRP、ET-1、IL-6、IL-17、DA等8項指標先聚合，在這些指標中IL-6、

11、DA、ET-1三者關系最為緊密；Foxp3mRNA、CD4+CD25+Treg、BNP、IL-10等4項指標再聚合，在這4項指標中CD4+CD25+Treg、IL-10、BNP三者關系最為緊密。
　　 3.2.3 AA大鼠心功能各參數(shù)與NEI網(wǎng)絡各指標相關性
　　 本實驗研究結果顯示：從大鼠心功能各參數(shù)與NEI網(wǎng)絡各指標之間密切相關。
　　 3.2.4 XFC對AA大鼠的心功能的影響
　　 與NC組比較，

12、MC組HR、CI、LVESP、LVEDP顯著升高(p<0.01或p<0.05)，±dp/dtmax顯著下降(P<0.05)；
　　 與MC組比較，各治療組心功能各參數(shù)明顯改善；
　　 各治療組間比較XFC組更能改善心功能各參數(shù)。
　　 3.2.5 XFC對AA大鼠的體質(zhì)量、足跖腫脹度、AI的影響
　　 XFC組大鼠的體質(zhì)量顯著高于MC組、MTX組及TPT組，與NC組無顯著差異(P>0.05)，MTX組及T

13、PT組體質(zhì)量顯著低于NC組(P<0.01)，說明XFC對大鼠體質(zhì)量增長無不良影響。
　　 各治療組對AA大鼠足跖腫脹度，AI影響顯著低于MC組(P<0.01或P<0.05)，各治療組間無明顯差異(P>0.05)，說明XFC與MTX及TPT一樣能降低AA大鼠足跖腫脹度和AI。
　　 3.2.6 XFC對AA大鼠NEI網(wǎng)絡的影響
　　 與NC組比較，MC組大鼠ET-1、TNF-α、BNP、IL-17、IL-6、5-H

14、T、DA含量明顯升高(P<0.01)，CGRP、IL-10、CD4+CD25+Treg、Foxp3含量明顯降低(P<0.01)；
　　 與MC組比較，各治療組NEI網(wǎng)絡指標均有所改善；
　　 治療組間比較，XFC組能更好改善NEI網(wǎng)絡指標。
　　 3.2.7 XFC對心肌結構的影響
　　 通過對心肌組織結構、超微結構和心肌組織MMP9、TIMP1表達水平的檢測發(fā)現(xiàn)：
　　 與NC組比較，MC組心肌

15、組織明顯病變；
　　 與MC組比較，各治療組心肌組織結構明顯改善；
　　 治療組間比較，XFC組心肌結構改善更為明顯。
　　 4結論：
　　 4.1從大鼠存在心功能改變；
　　 4.2從大鼠存在NEI網(wǎng)絡功能紊亂；
　　 4.3從大鼠心功能改變與NEI網(wǎng)絡功能紊亂具有緊密相關性；
　　 4.4 XFC對從大鼠一般體征、體質(zhì)量、足跖腫脹度、AI、心功能、NEI網(wǎng)絡指標、心肌結構具有良

16、好的調(diào)控作用。
　　 5基于NEI網(wǎng)絡探討XFC改善從大鼠心功能的作用機制
　　 5.1 XFC通過降低5-HT、DA的釋放，以調(diào)節(jié)心率。
　　 5.2 XFC通過調(diào)節(jié)ET-1與CGRP的平衡，改善心肌缺血和心肌細胞增殖以維持心臟的正常功能。
　　 5.3 XFC通過降低BNP的表達水平，改善從大鼠的心功能。
　　 5.4 XFC通過上調(diào)CD4+CD25+Treg，促進Foxp3表達，上調(diào)抑炎細胞