Hedgehog通路在佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)軟骨中的表達(dá)及部分功能研究.pdf

1、目的：探討Hedgehog(Hh)通路在佐劑性關(guān)節(jié)炎(AIA)大鼠軟骨中的表達(dá)及意義；及研究Hh通路阻斷劑環(huán)巴胺對(duì)AIA大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖凋亡的影響及抗凋亡機(jī)制。
　　方法：弗氏完全佐劑誘導(dǎo)AIA大鼠模型；免疫組織化學(xué)(SP)法觀察Hh信號(hào)通路相關(guān)分子(Shh，Ptch1,Smo，Gli1)在AIA大鼠關(guān)節(jié)軟骨中的蛋白表達(dá)情況；實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測Shh，Ptch1，Smo，Gli1，II型膠原(COII)和蛋白聚糖(a

2、ggrecan)的mRNA表達(dá)水平；并且把Hh信號(hào)通路相關(guān)分子的mRNA水平與AIA大鼠關(guān)節(jié)軟骨損傷程度（OARSI評(píng)分，COII和aggrecan mRNA表達(dá)水平）進(jìn)行相關(guān)性分析。胰酶-膠原酶法分離培養(yǎng)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞；環(huán)巴胺體外給藥處理AIA大鼠軟骨細(xì)胞；MTT法檢測細(xì)胞增殖；DNA電泳、Hoechst染色、Annexin V-FITC/PI雙染檢測細(xì)胞凋亡；RT-PCR檢測Shh,Gli1,Ptch1,Bcl-2,Bax和Caspa

3、se-3 mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.Hh通路在AIA大鼠軟骨中的表達(dá)及意義
　　AIA大鼠造模成功的基礎(chǔ)上，Shh，Ptch1,Smo，Gli1的蛋白和基因水平在AIA大鼠中的表達(dá)均明顯高于正常組；AIA大鼠軟骨組織中的COII和aggrecan的mRNA表達(dá)水平則顯著降低；AIA大鼠中Shh，Ptch1,Smo，Gli1 mRNA的表達(dá)水平與OARSI評(píng)分明顯正相關(guān)，與關(guān)節(jié)軟骨組織中COII,aggreca

4、n mRNA表達(dá)水平明顯負(fù)相關(guān)；
　　2.環(huán)巴胺對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖凋亡的影響及其抗凋亡機(jī)制
　　環(huán)巴胺(0.08,0.4,2,10,50μmol/L)劑量依賴性地提高AIA大鼠軟骨細(xì)胞增殖；AIA組可見凋亡細(xì)胞DNA梯狀條帶，環(huán)巴胺(0.4,2,10μmol/L)給藥組的梯狀條帶明顯減少；AIA組存在核碎裂與染色質(zhì)固縮，環(huán)巴胺給藥組均勻藍(lán)色熒光的細(xì)胞數(shù)量增多；流式分析結(jié)果表明AIA大鼠軟骨細(xì)胞凋亡率顯著升高，

5、環(huán)巴胺明顯減少細(xì)胞凋亡率；與正常組相比，AIA大鼠軟骨細(xì)胞中Hh通路相關(guān)分子(Shh，Ptch1，Gli1)mRNA表達(dá)顯著升高，抗凋亡基因Bcl-2 mRNA表達(dá)顯著下降，而促凋亡基因Bax,Caspase-3 mRNA表達(dá)明顯升高，環(huán)巴胺體外給藥能抑制Hh通路過度活化，提高Bcl-2 mRNA表達(dá)，并降低Bax，Caspase-3 mRNA表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1.Hh信號(hào)通路在AIA大鼠關(guān)節(jié)軟骨中明顯異?；罨?，并密切