辛伐他汀防治骨關(guān)節(jié)炎的實驗研究.pdf

1、第一部分 辛伐他汀對兔膝關(guān)節(jié)退行性骨關(guān)節(jié)炎動物模型軟骨形態(tài)學的影響
　　 目的：觀察辛伐他汀對兔骨性關(guān)節(jié)炎(OA) 模型中軟骨組織形態(tài)學的影響方法：健康新西蘭5周齡大白兔30只,平均體重2.6kg, 將動物隨機分為A、B、C、D、E五組, 每組6只動物，用戊巴比妥鈉(40mg/ kg 劑量) 麻醉。除A組外其余4組按照Hulth法造模。術(shù)后C、D、E組動物分別給予患膝立即關(guān)節(jié)腔注射0.01mg/ml、 0.1mg/ml和0.5m

2、g/ml辛伐他汀稀釋液，劑量為0.2ml/kg，每周1次，連續(xù)6周。B組則患膝關(guān)節(jié)腔注射等量生理鹽水,每周1次，連續(xù)6周。A組為空白對照組，動物不做任何處理。所有動物不做固定，分籠飼養(yǎng)。術(shù)后6周處死動物。取患膝全層關(guān)節(jié)軟骨，石蠟包埋切片，HE染色及番紅O染色，中性樹脂封片，利用解剖顯微鏡進行關(guān)節(jié)軟骨大體觀察，利用光學顯微鏡觀察染色后切片并進行Mankin評分。結(jié)果：B組軟骨關(guān)節(jié)面較其余各組破壞嚴重，且可見明顯潰瘍和裂隙，C、D、E組軟骨

3、結(jié)構(gòu)、形態(tài)及軟骨細胞基質(zhì)對番紅O異染性均優(yōu)于B組。A、C、D、E組軟骨Mankin評分均低于B組，其中A組、D組和E組較B組差異有顯著性（P<0.05）。結(jié)論：① 本實驗采用Hulth法建立OA模型成功；② OA早期關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射辛伐他汀可以防止軟骨退變，促進軟骨基質(zhì)合成，對軟骨有保護作用。
　　 第二部分 辛伐他汀對兔膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎動物模型關(guān)節(jié)液與軟骨中白介素-1、Ⅱ型膠原、MMP-13水平的影響
　　 目的：研究辛伐

4、他汀關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射對OA模型關(guān)節(jié)液及軟骨中IL-1及MMP-13和Ⅱ型膠原表達的影響。方法：健康新西蘭5周齡大白兔30只,平均體重2.6kg, 將動物隨機分為A、B、C、D、E五組, 每組6只動物，用戊巴比妥鈉(40mg/ kg 劑量) 麻醉。除A組外其余4組按照Hulth法造模。術(shù)后C、D、E組動物分別給予患膝立即關(guān)節(jié)腔注射0.01mg/ml、 0.1mg/ml和0.5mg/ml辛伐他汀稀釋液，劑量為0.2ml/kg，每周1次，連續(xù)6周

5、。B組則患膝關(guān)節(jié)腔注射等量生理鹽水,每周1次，連續(xù)6周。A組為空白對照組，動物不做任何處理。所有動物不做固定，分籠飼養(yǎng)。術(shù)后6周處死動物。取動物患膝關(guān)節(jié)液和關(guān)節(jié)軟骨，利用RT-PCR技術(shù)檢測軟骨細胞中MMP-13和Ⅱ型膠原mRNA表達,用ELISA檢測關(guān)節(jié)液IL-1的含量，運用免疫組織化學SABC法檢測軟骨組織內(nèi)MMP-13的表達情況。結(jié)果：A、C、D、E組IL-1含量均明顯低于B組，差異有顯著性（P<0.05）；A、D、E組MMP-1

6、3 mRNA表達量均明顯低于B組，且差異有顯著性（P<0.05）；A、D、E組Ⅱ型膠原mRNA表達均明顯高于B組，差異有顯著性（P<0.05）。結(jié)論:在OA早期關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射辛伐他汀能夠減輕關(guān)節(jié)軟骨炎癥反應，增強膠原合成代謝，減輕骨關(guān)節(jié)炎軟骨的退變。
　　 第三部分 辛伐他汀對兔膝OA模型中軟骨細胞凋亡的影響
　　 目的：觀察辛伐他汀對兔骨性關(guān)節(jié)炎(OA) 模型中軟骨細胞凋亡率的影響。方法：健康新西蘭5周齡大白兔30只,平

7、均體重2.6kg, 將動物隨機分為A、B、C、D、E五組, 每組6只動物，用戊巴比妥鈉(40mg/ kg 劑量) 麻醉。除A組外其余4組按照Hulth法造模。術(shù)后C、D、E組動物分別給予患膝立即關(guān)節(jié)腔注射0.01mg/ml、 0.1mg/ml和0.5mg/ml辛伐他汀稀釋液，劑量為0.2ml/kg，每周1次，連續(xù)6周。B組則患膝關(guān)節(jié)腔注射等量生理鹽水,每周1次，連續(xù)6周。A組為空白對照組，動物不做任何處理。所有動物不做固定，分籠飼養(yǎng)。術(shù)

8、后6周處死動物。取動物患膝關(guān)節(jié)軟骨，利用流式細胞儀檢測軟骨細胞凋亡率；利用RT-PCR技術(shù)檢測軟骨細胞中Bcl-1mRNA表達。結(jié)果：C、D、E組軟骨細胞凋亡率較B組下降，其中D組和E組軟骨細胞凋亡率較B組顯著下降，差異有顯著性（P<0.05）；C、D、E組軟骨細胞Bcl-1mRNA相對表達量均較B組下降，其中D組和E組Bcl-1mRNA相對表達量較B組顯著下降，差異有顯著性（P<0.05）。結(jié)論 辛伐他汀可以呈劑量依賴性降低OA軟骨細

9、胞凋亡率，其機制可能與辛伐他汀下調(diào)Bcl-1mRNA表達有關(guān)。
　　 第四部分 辛伐他汀對IL-1β誘導的兔關(guān)節(jié)軟骨細胞凋亡的保護作用
　　 目的：觀察辛伐他汀對兔骨性關(guān)節(jié)炎(OA) 軟骨細胞凋亡的影響。方法：試驗分為5組，取5周齡兔原代關(guān)節(jié)軟骨細胞進行體外培養(yǎng)，分別給予10μg/L的IL-1β以及不同濃度辛伐他汀進行預處理，然后分別檢測不同組中軟骨細胞的凋亡率、iNOS mRNA的表達、線粒體膜電位水平以及NO的含量。