腫瘤抗原肽篩選與驗證的方法新探.pdf

1、該研究共分四部分,主要內容和結果如下:一、特異性T細胞對抗原肽—MHC I類分子—gfp復合物攝取的研究;在此研究中運用MHC I類分子-gfp融合蛋白標記抗原遞呈細胞,通過觀測gfp蛋白在細胞之間的轉移,來初步驗證腫瘤免疫中也存在TCR介導的抗原肽-MHC I類分子復合物的內吞.二、K<'b>-his<,6>融合基因的構建及其在真核細胞中的表達;上一部分的實驗初步研究了k<'b>-gfp融合蛋白與TCR的相互作用,但在進一步的分離和功

2、能實驗中卻遇到了障礙.一方面,作為標記與目的蛋白融合可以方便的標示目的蛋白的表達情況,但gfp本身是個相當大的蛋白,會降低目的蛋白的表達;另一方面,進一步分離時需使用抗gfp的單克隆抗體進行免疫共沉淀,既不經(jīng)濟又不方便.His<,6>是近來使用較多的一類標記分子,六個組氨酸可以通過氫鍵與金屬離子(如鎳離子)螯合成環(huán)狀結構,如果把鎳離子固定在凝膠柱上,蛋白樣品過柱時,帶有his<,6>標記的蛋白就會被吸附在柱上,從而能很方便地被分離出來.

3、運用his<,6>標記蛋白可以提供很多便利.三、特異性T細胞對抗原肽—MHC I類分子—his<,6>復合物攝取的分析;黑色素瘤是一種惡性程度相當高的惡性腫瘤,也是在腫瘤免疫中研究最多的腫瘤之一,其腫瘤抗原的免疫原性較強,也便于對其進行深入的功能研究,因此該研究選擇鼠黑色素瘤細胞B16作為腫瘤抗原肽研究的主要模型細胞.四、牛痘病毒介導腫瘤抗原肽微小基因體內表達對抗原肽特異性的驗證分析;研究中我們選取了P815的腫瘤相關抗原肽:KYQAV