基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1在BMSCs定向趨化及骨修復(fù)中作用的研究.pdf

1、目的: 探討基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(Stromal cell-derived-1，SDF-1)在BMSCs向骨折部位定向遷移及骨折修復(fù)過程的作用，為將來通過調(diào)控BMSCs的定向遷移來促進(jìn)骨折愈合提供依據(jù)。 方法： (1)經(jīng)密度離心法從GFP轉(zhuǎn)基因C57小鼠骨髓內(nèi)分離培養(yǎng)BMSCs。并通過向成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)證明其具有多向分化能力，利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其細(xì)胞表面分子CD44和CD34的表達(dá)。 (2)4周齡雌

2、性C57小鼠用10Gy的X線照射后，將1000個(gè)攜帶GFP的BMSCs與雄性小鼠的骨髓非貼壁細(xì)胞按1:1000制成混合細(xì)胞懸液后從其尾靜脈內(nèi)注入，建立嵌合體動(dòng)物模型。通過激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)嵌合體GFP陽性細(xì)胞在骨髓細(xì)胞中的比例。 (3)嵌合體建立后，將135只嵌合體小鼠隨機(jī)分為A、B、C組。3組均建立左脛骨骨折模型，A組為空白對(duì)照組，骨折局部?jī)H加入ECM； B組：100ng/mlSDF-1+ECM；C組：2ug/mlSDF-1

3、抗體+ECM，三組局部注射的總量相同，均為0.1ml。分別于術(shù)后第14、21，28天拍攝左下肢側(cè)位X線片，拍片后處死，取骨折部位標(biāo)本行組織學(xué)檢查，于術(shù)后第1、3、7、14天利用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)各組骨折端GFP陽性細(xì)胞的數(shù)量，并于術(shù)后28天取骨折標(biāo)本的進(jìn)行抗折力測(cè)試。 結(jié)果: (1)分離培養(yǎng)的BMSCs呈克隆樣生長(zhǎng)，經(jīng)激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)表明它們均呈GFP陽性；經(jīng)成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)后出現(xiàn)鈣沉積；經(jīng)成脂肪誘導(dǎo)后形成脂肪滴。

4、 (2)嵌合體建立8周后，移植的細(xì)胞歸巢至骨髓內(nèi)，其中GFP陽性細(xì)胞比例為3.12±0.11％。 (3)術(shù)后第1、3、7、14天各相應(yīng)時(shí)相點(diǎn)，骨折端的BMSCs數(shù)量B組>A組>C組，有顯著性差異(PA組>C組，有顯著性差異(P<0.05)，在第28天，A組>B組>C組，有顯著性差異(P<0.05)；術(shù)后28天抗折力： B組>A組>C組，有顯著性差異(P<0.05)