類波氏真眼點(diǎn)藻二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶(DGAT)基因的克隆與功能分析.pdf

1、暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文類波氏真眼點(diǎn)藻二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶（類波氏真眼點(diǎn)藻二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶（DGAT）基因的克隆與功能）基因的克隆與功能分析分析CloningfunctionalanalysisofdiacylglycerolacyltransferasegenesinEustigmatoscf.polyphem作者姓名：王元麗王元麗指導(dǎo)教師姓名李愛(ài)芬李愛(ài)芬張成武張成武及學(xué)位、職稱：博士博士教授教授學(xué)科、專業(yè)名稱：水生生

2、物學(xué)水生生物學(xué)論文提交日期：2014年5月論文答辯日期：2014年6月答辯委員會(huì)主席：論文評(píng)閱人：學(xué)位授予單位和日期：暨南大學(xué)碩士學(xué)位論文類波氏真眼點(diǎn)藻二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶（DGAT）基因的克隆與功能分析I摘要摘要類波氏真眼點(diǎn)藻（Eustigmatoscf.polyphem）屬于異鞭藻門(mén)（Heterokontophyta）真眼點(diǎn)藻綱（Eustigmatophyceae），是一種土壤黃綠色單細(xì)胞微藻。前期研究證實(shí)，該藻能合成多不飽和脂肪酸、

3、β胡蘿卜素和金藻昆布糖等高附加值生物活性物質(zhì)，特別是在氮限制培養(yǎng)后期能大量積累儲(chǔ)藏性油脂，是一株具有生物產(chǎn)品和生物燃料開(kāi)發(fā)潛能的微藻。本文以類波氏真眼點(diǎn)藻（E.cf.polyphem）為研究材料，克隆藻細(xì)胞TAG合成途徑中二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶（Diacylglycerolacyltransferase，DGAT）基因的cDNA全長(zhǎng)序列，通過(guò)外源表達(dá)確定基因的具體功能，探討類波氏真眼點(diǎn)藻（E.cf.polyphem）在氮限制培養(yǎng)時(shí)TAG積累

4、過(guò)程中DGAT的轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)情況，了解類波氏真眼點(diǎn)藻（E.cf.polyphem）中TAG合成代謝的分子機(jī)理與調(diào)控機(jī)制，為微藻生物能源的開(kāi)發(fā)提供一定的理論依據(jù)。研究結(jié)果如下：（1）利用RACE技術(shù)擴(kuò)增得到類波氏真眼點(diǎn)藻（E.cf.polyphem）二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶基因EcfpDGATb的cDNA全長(zhǎng)序列2347bp，同時(shí)分別得到EcfpDGATa和EcfpDGATc的3’cDNA序列309bp和480bp。（2）DNA序列分析發(fā)現(xiàn)Ec

5、fpDGATb全長(zhǎng)cDNA含有23bp5’和338bp3’非翻譯區(qū)（UntranslatedRegions，UTR）序列，開(kāi)放閱讀框（OpenReadingFrame，F(xiàn)）1986bp，編碼661個(gè)氨基酸；該蛋白質(zhì)N端具有43個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的預(yù)測(cè)信號(hào)肽和9個(gè)預(yù)測(cè)跨膜區(qū)，結(jié)構(gòu)域中包含6個(gè)II型DGAT的保守基序，說(shuō)明EcfpDGATb可能屬于編碼II型DGAT的基因家族成員。（3）EcfpDGATb的異源表達(dá)證實(shí)其能使TAG合成缺陷酵母菌株

6、恢復(fù)部分的油滴積累能力，并偏好于利用16C不飽和與18C脂肪酸合成TAG，說(shuō)明EcfpDGATb參與TAG的生物合成過(guò)程。（4）EcfpDGATb的mRNA相對(duì)表達(dá)量在兩種硝酸鈉濃度培養(yǎng)條件下都呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，在高氮組（18mmolLNaNO3）中培養(yǎng)36h時(shí)達(dá)到最高相對(duì)表達(dá)量，低氮組（6mmolLNaNO3）在96h達(dá)到最高，表明EcfpDGATbmRNA水平的表達(dá)對(duì)氮限制有一定的響應(yīng)。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞：類波氏真眼點(diǎn)藻；二酰甘油酰