IL-37對模擬失重下LPS誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的防護(hù)作用.pdf

1、背景/目的：
　　構(gòu)建IL-37b真核表達(dá)載體，利用細(xì)胞回轉(zhuǎn)培養(yǎng)系統(tǒng)模擬失重，探討IL-37對模擬失重下LPS誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的防護(hù)作用。
　　方法：
　　1.從人PBMCs中提取總RNA，利用RT-qPCR技術(shù)擴(kuò)增出IL-37b基因編碼區(qū)序列，克隆至pEGFP-N1真核表達(dá)載體，將構(gòu)建的重組質(zhì)粒pEGFP-N1/IL-37b轉(zhuǎn)染到THP-1細(xì)胞中，通過RT-qPCR和Western blot檢測IL-37的表達(dá)。

2、　　2.以THP-1細(xì)胞為研究對象，利用細(xì)胞回轉(zhuǎn)培養(yǎng)系統(tǒng)模擬失重，采用CCK-8法分別檢測回轉(zhuǎn)0h、6h、12h、24h、36h、48h對細(xì)胞增殖的影響，從而建立細(xì)胞失重模型，在此基礎(chǔ)上給予LPS刺激細(xì)胞，通過RT-qPCR和ELISA技術(shù)檢測模擬失重下LPS誘導(dǎo)釋放的炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β的表達(dá)。
　　3.利用細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)實(shí)現(xiàn)IL-37b在THP-1細(xì)胞中的過表達(dá)，通過RT-qPCR、ELISA以及Wester

3、n blot技術(shù)研究IL-37對模擬失重下LPS誘導(dǎo)釋放炎癥因子的影響。
　　結(jié)果：
　　1.雙酶切及基因測序結(jié)果顯示 IL-37b基因正確插入真核表達(dá)載體pEGFP-N1中；RT-qPCR和Western blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染THP-1細(xì)胞后，IL-37表達(dá)水平明顯升高（P＜0.01）。
　　2.細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，較短的回轉(zhuǎn)時間（<24h）對THP-1細(xì)胞的增殖無顯著影響，回轉(zhuǎn)48h時模擬失重對細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)

4、最為明顯（P<0.01）。進(jìn)一步給予細(xì)胞LPS刺激，RT-qPCR結(jié)果顯示，與單純給予LPS組相比，三種炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β的表達(dá)上調(diào)（P<0.05、P<0.01、P<0.01）；ELISA結(jié)果顯示，細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-α、IL-6、IL-1β的含量較LPS組升高（P<0.05、P<0.05、P<0.05）。
　　3.RT-qPCR結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染IL-37b后，與未轉(zhuǎn)染組相比，模擬失重下LPS刺激細(xì)胞產(chǎn)生的TN

5、F-α、IL-6、IL-1β表達(dá)降低（P<0.05、P<0.01、P<0.05），IL-37b明顯升高（P<0.01），NF-κB降低（P<0.05）；ELISA結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染IL-37b后，與未轉(zhuǎn)染組相比，模擬失重下LPS刺激細(xì)胞釋放的TNF-α、IL-6、IL-1β減少（P<0.05、P<0.05、P<0.05）；Western blot結(jié)果表明，THP-1細(xì)胞在正常條件下可以穩(wěn)定低表達(dá)IL-37，但在模擬失重條件下給予LPS刺激，