黃藤素對LPS誘導的子宮內(nèi)膜上皮細胞炎癥反應的抗炎作用及機制研究.pdf

1、子宮內(nèi)膜炎是機體無法自行清除入侵子宮內(nèi)膜的病原菌進而導致的炎癥反應，對當今奶牛等經(jīng)濟動物養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展有重大危害。目前抗生素、微生態(tài)制劑和中草藥等被廣泛用于治療子宮內(nèi)膜炎等子宮相關性疾病。近些年，中草藥對子宮內(nèi)膜炎等疾病的臨床治療成為了研究熱點，主要是因為其不僅能夠促進血液循環(huán)，促進子宮收縮，提升機體抗病能力，還能夠抗菌消炎，而且殘留少、毒副作用弱。黃藤素作為一種天然的植物藥，具有抗菌、消炎、抗病毒和調(diào)節(jié)免疫應答等多種藥理作用。臨床上，黃

2、藤素被廣泛用于治療人的慢性子宮內(nèi)膜炎、婦科炎癥、盆腔炎、胃腸炎、骨膜炎等疾病，但其在獸醫(yī)臨床中的應用研究卻很少，應用其治療奶牛等經(jīng)濟動物的子宮內(nèi)膜炎疾病的報道更少。為了研究黃藤素對子宮內(nèi)膜炎的抗炎作用及其可能的抗炎機制，開展了以下實驗。
　　1.黃藤素對gEECs毒性作用的檢測
　　黃藤素作用于山羊子宮內(nèi)膜上皮細胞(gEECs)后，通過MTT法檢測細胞的增殖情況;瑞氏-姬姆薩染色法觀察細胞的形態(tài)學變化，并通過測定乳酸脫氫酶(

3、LDH)的含量檢測胞膜的結(jié)構完整性。結(jié)果顯示，黃藤素對山羊子宮內(nèi)膜上皮細胞的安全劑量為≤250μg/mL，該劑量范圍內(nèi)藥物對細胞活力和細胞形態(tài)結(jié)構無顯著性影響;大于該劑量的黃藤素可顯著性提高子宮內(nèi)膜上皮細胞的膜通透性，對細胞產(chǎn)生毒性作用。黃藤素的濃度在0-100μg/mL時，促進細胞的增殖，而且增殖狀態(tài)良好，因此選擇低、中、高濃度分別為20、40和80μg/mL的黃藤素用于后續(xù)的實驗研究。
　　2.黃藤素對LPS誘導的gEECs炎

4、癥反應中相關細胞因子的影響
　　利用5μg/mL的LPS作用于gEECs12 h建立炎癥模型，然后用20，40和80μg/mL濃度的黃藤素對炎癥模型治療4、8、12、24、36h，分別收集正常細胞組、LPS炎癥模型組和藥物處理組的細胞上清液，ELISA實驗法測定各組細胞因子的含量，化學法檢測NO的含量。結(jié)果顯示，相比于對照組LPS誘導的炎癥反應中各細胞因子的分泌量顯著增多(P＜0.05)。黃藤素一方面可以上調(diào)抗炎因子IL-10的分

5、泌，另一方面又可以下調(diào)促炎性因子IL-1β、TNF-α、IL-6和炎性介質(zhì)NO的分泌量，調(diào)控炎癥反應發(fā)生的強弱。而且，黃藤素還可以抑制MMP-2和MMP-9的分泌。說明，黃藤素不僅對LPS誘導的山羊子宮內(nèi)膜細胞建立的炎癥模型具有抗炎作用，還可以對子宮內(nèi)膜上皮細胞結(jié)構的完整性起到保護作用。
　　3.黃藤素對LPS誘導的gEECs炎癥模型中TLR4信號通路的影響
　　利用5μg/mL的LPS作用于gEECs12 h建立炎癥模型，

6、濃度分別為20，40和80μg/mL的黃藤素對炎癥模型治療8h，然后用RT-PCR法對TLR4信號通路上各蛋白的基因水平進行了測定。結(jié)果顯示，LPS炎癥模型組中IL-1β、TLR4、CD14、TRIF和NF-κBp65mRNA的表達量均顯著高于對照組（P＜0.05），而且黃藤素能顯著抑制這些蛋白mRNA的表達水平，而MyD88的基因表達量沒有任何變化(P＞0.05）。WB檢測結(jié)果顯示，黃藤素作用下，炎性細胞中NF-κBp65的蛋白表達水