秦皮中秦皮乙素的提取及衍生化與抗腫瘤活性研究.pdf

1、秦皮為常用中藥，是木犀科植物白蠟樹的干燥枝皮或干皮，主產(chǎn)于我國東北、華北、華西等地區(qū)。秦皮乙素是中藥秦皮的主要有效成分，化學(xué)名為6，7-二羥基香豆素，具有抗腫瘤、抗炎鎮(zhèn)痛、抗氧化，保護(hù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)等多種藥理活性，因此秦皮乙素具有廣闊的藥用開發(fā)前景。在藥物化學(xué)里，天然產(chǎn)物固有的生物活性十分重要，并具有明確的靶點(diǎn)作用，可通過藥物合成和設(shè)計(jì)獲得具有更高藥理活性的衍生物并滿足藥物分子庫的結(jié)構(gòu)多樣性。秦皮乙素結(jié)構(gòu)中的6，7-二酚羥基是重要的反應(yīng)活

2、性位點(diǎn)，可在該位置引入取代基團(tuán)或官能團(tuán)對其進(jìn)行化學(xué)修飾，通過化學(xué)反應(yīng)衍生化獲得結(jié)構(gòu)新穎且具有更高活性的秦皮乙素衍生物。
　　基于以上，本課題以秦皮乙素為對象，對其提取分離，衍生化及秦皮乙素衍生物的抗腫瘤活性進(jìn)行了研究。從秦皮中提取得到秦皮乙素并通過液液萃取和重結(jié)晶分離純化得到高純度的秦皮乙素?；陔s合體理論的設(shè)計(jì)方法，將秦皮乙素與肉桂酸、水楊酸等化合物進(jìn)行酯化，進(jìn)一步得到新的秦皮乙素衍生物并通過MTT法研究其對人肝癌HepG2、人

3、結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞系的抗腫瘤活性。研究結(jié)果如下:
　　1.研究了秦皮乙素的提取分離工藝。采用乙醇回流法對秦皮中的秦皮乙素進(jìn)行提取，以秦皮乙素含量為指標(biāo)，通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化秦皮乙素的提取條件。結(jié)果表明:在乙醇濃度75％、提取料液比1∶7、提取3次、提取時(shí)間2h時(shí)，秦皮乙素含量最高，在此工藝條件下的秦皮乙素含量為1.83 mg/g。采用液液萃取和重結(jié)晶對最佳提取工藝下的秦皮乙素提取液分離純化。通過液液萃取得到秦皮乙素粗

4、品，再將秦皮乙素粗品經(jīng)重結(jié)晶得到純度較高的秦皮乙素單體，并以秦皮乙素純度和收率為綜合指標(biāo)，通過單因素實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了秦皮乙素單體的重結(jié)晶工藝。結(jié)果表明:最佳提取條件為醇水比1∶3。在該條件下得到的秦皮乙素純度為98.38％，收率為39.7％。
　　2.以秦皮乙素的基本結(jié)構(gòu)為母核對其7位羥基部分進(jìn)行酯化修飾，與柱層析色譜對其進(jìn)行分離純化，其結(jié)構(gòu)通過1HNMR、13C NMR手段表征，確證為目標(biāo)秦皮乙素衍生物的結(jié)構(gòu)。
　　3.研究了1

5、0個(gè)秦皮乙素衍生物對腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用，同時(shí)以秦皮乙素為對照。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，6種秦皮乙素衍生物的抑制人肝癌細(xì)胞HepG2增殖作用高于秦皮乙素，5種秦皮衍生物的抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116增殖作用高與秦皮乙素。秦皮乙素與肉桂酸類化合物酯化得到的秦皮乙素衍生物活性優(yōu)于合成的其他6種秦皮乙素衍生物，且在1～100μmol/L范圍內(nèi)呈現(xiàn)較好的劑量依賴性。其中(E)-6-羥基-2-氧代-7-色烯-3-（3，4-二甲氧基苯基）丙烯酸酯(45)