去四甲斑蝥素聯(lián)合吳茱萸堿對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞的影響的體外研究.pdf

1、目的：研究去甲斑蝥素(NCTD)與吳茱萸堿(EVO)聯(lián)合用藥對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞增殖、周期凋亡的體外研究，以期為二者聯(lián)合治療肝癌提供理論依據(jù)。
　　方法：采用MTT方法檢測(cè)去甲斑蝥素、吳茱萸堿及二者聯(lián)合用藥對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞株的增殖影響;運(yùn)用FCM技術(shù)檢測(cè)兩藥聯(lián)合誘導(dǎo)后對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞株周期、凋亡和活性氧的影響;采用western blotting技術(shù)檢測(cè)兩藥聯(lián)合作用于肝癌HepG2細(xì)胞后Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)變化。<

2、br>　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1、不同濃度梯度的NCTD，EVO作用于HepG2細(xì)胞后，細(xì)胞的生長情況受到不同程度的抑制，這種抑制作用與藥物濃度和作用時(shí)間呈依賴關(guān)系，NCTD，EVO對(duì)HepG2細(xì)胞作用24 h，48 h，72 h的IC50值分別為177.6，102.1，76.3μmol/L和129.9，20.9，9.3μmol/L;
　　2、NCTD與EVO聯(lián)合處理HepG2細(xì)胞時(shí)，EVO能明顯的增強(qiáng)NCTD對(duì)癌細(xì)胞的抑制作用

3、， CI均＜1，兩者聯(lián)合有協(xié)同效應(yīng)，兩藥聯(lián)合作用HepG2細(xì)胞48 h的IC50值為NCTD(38.1μmol/L)+EVO(7.6μmol/L);
　　3、與對(duì)照組及單獨(dú)用藥組比較，10μmol/L NCTD和2μmol/L EVO聯(lián)合用藥作用48h后，細(xì)胞周期阻滯在G2/M期的比例增加，G2/M期比例由EVO（36.13±1.63）％，NCTD（10.67±0.89）％上升至聯(lián)合用藥(73.42±1.92)％(P＜0.05);

4、
　　4、40μmol/L NCTD和8μmol/L EVO聯(lián)合誘導(dǎo)肝癌HepG2細(xì)胞48h，細(xì)胞凋亡率增加，凋亡率從單獨(dú)用藥EVO（15.78±3.08）％，NTCD（11.47±1.60）％增加至聯(lián)合用藥組的(21.86±2.70)％，藥物組與對(duì)照組相比P＜0.05;
　　5、與對(duì)照組比較，HepG2細(xì)胞經(jīng)40μmol/L NCTD、8μmol/L EVO以及NCTD聯(lián)合EVO處理48h后活性氧表達(dá)升高(P＜0.05)。

5、
　　6、40μmol/L NCTD和8μmol/L EVO聯(lián)合48h后Bax的蛋白表達(dá)水平均明顯提高，Bcl-2的表達(dá)水平呈下降趨勢(shì)，同時(shí)，兩者聯(lián)合用藥可使蛋白表達(dá)變化更加的明顯(P＜0.05)
　　結(jié)論：
　　1、去甲斑蝥素和吳茱萸堿能抑制肝癌HepG2細(xì)胞生長，促進(jìn)凋亡，兩藥對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞有協(xié)同抑制效應(yīng)。
　　2、NCTD與EVO聯(lián)合使用可通過下調(diào)Bax/Bcl-2比例啟動(dòng)細(xì)胞凋亡，使細(xì)胞周期阻滯在G