17β-雌二醇及其代謝產(chǎn)物2-甲氧基雌二醇與慢性低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠體內(nèi)內(nèi)皮素-1及其受體關(guān)系的研究.pdf

1、目的:肺動(dòng)脈高壓(pulmonary artery hrpertension，PAH)是以肺血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞增生遷移，凋亡抵抗，逐漸導(dǎo)致以肺血管血管壁增厚及血管腔狹窄甚至阻塞為特征的肺血管重構(gòu)性疾病[1]。內(nèi)皮素-1(endothelin-1，ET-1)是最近探究相對(duì)較多的可能與肺血管再建緊密相關(guān)的一類強(qiáng)縮血管肽類，研究發(fā)現(xiàn)它在PAH患者肺動(dòng)脈中濃度明顯上升，且與PAH的嚴(yán)重程度和預(yù)后關(guān)系緊密，合成和分泌ET-1的主要為肺血管內(nèi)

2、皮細(xì)胞，其次為肺血管平滑肌細(xì)胞(Smooth muscle cell，SMC)。ET-1作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞和SMC的方式為經(jīng)ETAR或ETBR通過旁分泌或自分泌，從而共同調(diào)節(jié)血管的收縮和舒張。雌激素(Estradiol，E2)能夠使各類不利因素對(duì)肺血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)的損害明顯減輕，能夠改善血管壁重建以及使血管舒張。從而發(fā)揮其在肺血管系統(tǒng)中的護(hù)衛(wèi)作用，但其機(jī)制至今還未明確。在這項(xiàng)研究中，通過對(duì)低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠模型的建立，了解

3、內(nèi)皮素1及其受體在肺組織中的缺氧條件下的表達(dá)變化，探討內(nèi)皮素-1、內(nèi)皮素受體在缺氧性肺動(dòng)脈高壓病發(fā)過程當(dāng)中的功用以及雌激素及其代謝產(chǎn)物2-甲氧基雌二醇(2-Methoxyextradiol，2ME)對(duì)內(nèi)皮素-1、內(nèi)皮素受體的影響。
　　方法:
　　1、缺氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠模型的建立及分組:選用隨機(jī)數(shù)字法將大鼠隨機(jī)分為A假手術(shù)組B去勢+E2組C去勢+2ME組D去勢組E假手術(shù)+低氧組F去勢+低氧+E2組G去勢+低氧+2ME組H去

4、勢+低氧組A組、E組打開腹腔找到卵巢后不做處理，直接還納縫合。B組C組F組G組，打開腹腔，沿輸卵管找到卵巢，切除雙側(cè)卵巢后，分別給予E220μg/kg/d、2-甲氧基雌二醇240μg/kg/d皮下注射。D組、H組，沿輸卵管找到卵巢，行雙側(cè)卵巢切除。將E組、F組、G組、H組大鼠放于常壓低氧艙內(nèi)，用鈉石灰和無水cacl2吸取過剩的CO2和H2O，保持二氧化碳濃度小于0.5％，維持箱內(nèi)氧濃度為(10±0.5)％，每日連續(xù)缺氧氧24h，共8周。

5、各組大鼠均在行手術(shù)后，常氧條件下適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，再放入設(shè)置環(huán)境中飼養(yǎng)。
　　2、低氧性大鼠肺動(dòng)脈高壓變化:低氧8周后，用右心導(dǎo)管法測量大鼠平均肺動(dòng)脈壓力(mean pulmonary artery pressure，mPAP)，稱量法獲得右心室肥厚指數(shù)(right ventricule hypertrophy index，RVHI)，HE染色法觀察肺小動(dòng)脈重構(gòu)(hypoxic pulmonary artery remodeling

6、，HPSR)。
　　3、采用RT-PCR法檢測肺組織中ETAR、ETBR mRNA的表達(dá):
　　4、采用放射免疫法測定各組大鼠肺組織內(nèi)ET-1的含量。
　　結(jié)果:
　　1、各組大鼠一般狀況:造模8周后，低氧環(huán)境下的大鼠出現(xiàn)鼠毛顏色暗淡、雙眼虹膜較常氧組變暗發(fā)紅、呼吸窘迫、進(jìn)食急驟減少，隨著在低氧條件下放置時(shí)間的增長，大鼠活動(dòng)度逐步減少，最后以安靜休息為主要表現(xiàn)，未見死亡。與假手術(shù)組相比，假手術(shù)+低氧組及去勢+低氧

7、組大鼠體重增長顯著減慢;去勢+低氧E2組、去勢+低氧+2ME組大鼠體重增長速度緩慢;去勢+E2組、去勢+2ME組、去勢組大鼠體重?zé)o明顯變化。
　　2、各組大鼠肺小動(dòng)脈、mPAP及右心室形態(tài)學(xué)變化:光鏡下，A組大鼠肺動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞連續(xù)扁平，分布、厚薄、尺寸較一致，并沒有內(nèi)皮細(xì)胞腫脹和壞死，肺動(dòng)脈壁結(jié)構(gòu)正常;H組大鼠肺內(nèi)血管壁顯著變厚，肺小動(dòng)脈中膜SMC數(shù)目增加，中膜(PAMT)變厚，管腔增厚程度最為顯著，甚至部分出現(xiàn)塌陷;F組、G

8、組大鼠肺血管管壁的結(jié)構(gòu)改變介于E組和H組之間;B組、C組、D組大鼠肺血管管壁的結(jié)構(gòu)大致正常。與A組相比，H組mPAP升高最為明顯，F(xiàn)組、G組mPAP顯著升高，介于H組和E組之間，且F組和G組間mPAP水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;B組、C組和D組的mPAP均無明顯變化。RVHI值的變化同mPAP的變化。
　　3、各組大鼠肺組織中ET-1的含量:與假手術(shù)組相比，假手術(shù)+低氧組和去勢+低氧組大鼠ET-1水平顯著升高，去勢+低氧組更甚;去勢+低

9、氧+E2組、去勢+低氧+2ME組ET-1水平明顯升高，介于假手術(shù)+低氧組及去勢+低氧組之間，且去勢+低氧+E2組較去勢+低氧+2ME組升高更為明顯;去勢組、去勢+E2組、去勢+2ME組ET-1水平亦有所升高，但升高幅度不及其各自低氧對(duì)照組，且去勢+E2組較去勢+2ME組升高更為明顯。
　　4、各組肺組織中ETAR的表達(dá):與假手術(shù)組相比，假手術(shù)+低氧組和去勢+低氧組大鼠ETAR水平顯著升高，去勢+低氧組更甚;去勢+低氧+E2組、去勢

10、+低氧+2ME組ETAR水平明顯升高，介于假手術(shù)+低氧組及去勢+低氧組之間，且兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;去勢組、去勢+E2組、去勢+2ME組ETAR水平亦有所升高，但升高幅度不及其各自低氧對(duì)照組，且去勢+E2組與去勢+2ME組間無明顯差異。
　　5、各組肺組織中ETBR的表達(dá):與假手術(shù)組相比，假手術(shù)+低氧組和去勢+低氧組大鼠ETBR水平顯著降低，去勢+低氧組更甚;去勢+低氧+E2組、去勢+低氧+2ME組ETBR水平明顯降低，介于假手

11、術(shù)+低氧組及去勢+低氧組之間，且兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;去勢組、去勢+E2組、去勢+2ME組ETBR水平亦有所降低，但降低幅度不及其各自低氧對(duì)照組，且去勢+E2組與去勢+2ME組間無明顯差異。
　　結(jié)論:
　　1、低氧情況下，大鼠肺組織內(nèi)ET-1及ETARmRNA含量明顯增加，而ETBR mRNA含量明顯下降。
　　2、肺組織內(nèi)ET-1、ETAR表達(dá)升高及ETBR表達(dá)下降對(duì)低氧性肺動(dòng)脈高壓的形成發(fā)揮了重要的作用。