17-β雌二醇和2-甲氧基雌二醇對(duì)去勢(shì)及低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠eNOS-NO的影響.pdf

1、目的:肺動(dòng)脈高壓(pulmonary arterial hypertension，PAH)是多種心肺疾病發(fā)展過程中重要的病理生理環(huán)節(jié)，從目前研究來(lái)看多種原因可導(dǎo)致PAH，其中由長(zhǎng)期慢性低氧造成的低氧性肺動(dòng)脈高壓(hypoxic pulmonaryarterial hypertension，HPAH）成為近年來(lái)研究的熱點(diǎn)。由肺血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的一氧化氮(nitric oxide，NO)對(duì)維持肺血管正常結(jié)構(gòu)及肺循環(huán)低阻力狀態(tài)有著重要的作用。

2、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)是利用體內(nèi)L-精氨酸(arginine，Arg)合成NO的關(guān)鍵酶，是參與調(diào)節(jié)NO生成的重要物質(zhì)。17β-雌二醇(17β-estradiol/estradiol，E2)及其代謝產(chǎn)物2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol，2ME)可干預(yù)低氧性肺動(dòng)脈高壓的形成過程。本研究擬應(yīng)用經(jīng)去勢(shì)處理后雌性SD大鼠建立低氧性肺動(dòng)脈高壓模型，通過觀察并比較在E2及2ME干預(yù)下各

3、組大鼠血清中NO、eNOS含量及肺組織中eNOS mRNA含量，探討并比較E2和2ME對(duì)去勢(shì)低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠eNOS/NO的影響。
　　方法:
　　1、模型建立:將80只健康雌性SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組、去勢(shì)組、去勢(shì)+E2組、去勢(shì)+2ME組、假手術(shù)+低氧組、去勢(shì)+低氧+E2組、去勢(shì)+低氧+2ME組、去勢(shì)+低氧組。假手術(shù)組:打開腹腔找到卵巢后不做處理，直接還納;去勢(shì)組:行雙側(cè)卵巢切除術(shù):沿輸卵管找到雙側(cè)卵巢后，結(jié)

4、扎輸卵管及營(yíng)養(yǎng)血管，將卵巢切除后關(guān)閉腹腔;去勢(shì)+E2組:將卵巢切除后，予E2（20μg·kg-1·d-1）皮下注射;去勢(shì)+2ME組:切除卵巢后，予2ME（240μg·kg-1·d-1）皮下注射;假手術(shù)組+低氧組:假手術(shù)后放入動(dòng)物低氧箱內(nèi)飼養(yǎng)，24h持續(xù)供應(yīng)氧濃度為（10±0.5）％空氣和氮?dú)獾幕旌蠚怏w。去勢(shì)+低氧+E2組:切除卵巢后，給予E2（20μg·kg-1·d-1）皮下注射并置于上述低氧環(huán)境下飼養(yǎng)。去勢(shì)+低氧+2ME組:切除卵巢后

5、，給予2ME（240μg·kg-1·d-1）皮下注射并置于上述低氧環(huán)境下飼養(yǎng);去勢(shì)+低氧組:切除卵巢后置于上述低氧環(huán)境下飼養(yǎng)。8組大鼠均置于同一房間以相同飼料喂養(yǎng)8周。
　　2、觀察大鼠一般狀況及肺循環(huán)受累情況:日常觀察大鼠一般狀況，飼養(yǎng)8周后測(cè)量大鼠體重;用右心導(dǎo)管法測(cè)定大鼠肺動(dòng)脈壓并計(jì)算出平均肺動(dòng)脈壓(mean pulmonary artery pressure，mPAP)，后斷頭放血處死大鼠，依據(jù)RV/(LV+SP)計(jì)算出右

6、心室肥大指數(shù)(right ventricule hypertrophyindex，RVHI)，并對(duì)肺小動(dòng)脈重塑(hypoxic pulmonary artery remodeling，HPSR)進(jìn)行觀察。
　　3、采用硝酸還原酶法測(cè)定大鼠血清中NO含量。
　　4、應(yīng)用化學(xué)法測(cè)定大鼠血清中eNOS的含量。
　　5、應(yīng)用RT-PCR測(cè)定肺組織中eNOS mRNA含量。
　　結(jié)果:
　　1、大鼠的一般狀態(tài)及體重情

7、況:低氧箱中大鼠出現(xiàn)活動(dòng)及進(jìn)食減少，毛色變暗，同時(shí)隨著實(shí)驗(yàn)進(jìn)行，其活動(dòng)逐漸減少，最終以靜臥為主，無(wú)死亡現(xiàn)象發(fā)生。而常氧條件下的大鼠生長(zhǎng)狀況及活動(dòng)度良好，與實(shí)驗(yàn)初期無(wú)異。與假手術(shù)組比較，假手術(shù)+低氧組、去勢(shì)+低氧+E2組、去勢(shì)+低氧+2ME組大鼠體重增長(zhǎng)緩慢(P＜0.05)，且去勢(shì)+低氧組大鼠體重減輕尤為明顯（P＜0.01），而去勢(shì)+E2組、去勢(shì)+2ME組、去勢(shì)組大鼠體重與假手術(shù)組無(wú)明顯差異。
　　2、大鼠平均肺動(dòng)脈(mPAP)比較

8、:與假手術(shù)組大鼠比較，假手術(shù)+低氧組、去勢(shì)+低氧+E2組、去勢(shì)+低氧+2ME組大鼠mPAP均呈現(xiàn)明顯升高(P＜0.01)，且去勢(shì)+低氧組大鼠mPAP升高更為顯著，去勢(shì)+低氧+E2組、去勢(shì)+低氧+2ME組大鼠mPAP升高幅度不及假手術(shù)+低氧組和去勢(shì)+低氧組大鼠;而去勢(shì)+E2組、去勢(shì)+2ME組、去勢(shì)組大鼠mPAP與假手術(shù)組無(wú)明顯差異
　　3、大鼠右心室及肺小血管形態(tài)改變:在光鏡下，假手術(shù)組、去勢(shì)+E2組、去勢(shì)+2ME組、去勢(shì)組大鼠肺小

9、動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)正常、分布均勻連續(xù)，并無(wú)水腫壞死，肺小動(dòng)脈管壁薄而結(jié)構(gòu)形態(tài)正常;而去勢(shì)+低氧組大鼠肺小動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增多，中膜明顯增厚，管腔變窄;假手術(shù)+低氧組、去勢(shì)+低氧+E2組、去勢(shì)+低氧+2ME組肺動(dòng)脈管壁介于假手術(shù)組及去勢(shì)+低氧組之間。與假手術(shù)組比較，假手術(shù)+低氧組、去勢(shì)+低氧+E2組、去勢(shì)+低氧+2ME組大鼠右心肥厚指數(shù)即RV/(LV+SP)比值均明顯升高(P＜0.01)，且以去勢(shì)+低氧組大鼠升高更為明顯(P＜0.01)，

10、而去勢(shì)+E2組、去勢(shì)+2ME組、去勢(shì)組大鼠右心肥厚指數(shù)與假手術(shù)組無(wú)明顯差異。
　　4、大鼠血清NO含量的變化:與假手術(shù)組比較，假手術(shù)+低氧組、去勢(shì)+低氧+E2組大鼠血清NO含量減少(P＜0.05)，且以去勢(shì)+低氧組大鼠血清NO含量減少最為明顯(P＜0.01)，去勢(shì)+低氧+2ME組大鼠血清NO含量介于去勢(shì)+低氧+E2組與去勢(shì)+低氧組大鼠之間;而去勢(shì)+E2組、去勢(shì)+2ME組、去勢(shì)組大鼠血清NO含量與假手術(shù)組無(wú)明顯差異
　　5、大

11、鼠血清e(cuò)NOS含量的變化:與假手術(shù)組比較，去勢(shì)+低氧+E2組及去勢(shì)+低氧+2ME組大鼠血清e(cuò)NOS含量明顯降低（P＜0.05），且去勢(shì)+低氧組大鼠血清e(cuò)NOS含量降低更為明顯(P＜0.01);而假手術(shù)+低氧組、去勢(shì)+E2組、去勢(shì)+2ME組、去勢(shì)組大鼠血清e(cuò)NOS含量與假手術(shù)組無(wú)明顯差異。
　　6、大鼠肺組織eNOS mRNA含量的比較:與假手術(shù)組比較，去勢(shì)+低氧+E2組及去勢(shì)+低氧+2ME組大鼠肺組織eNOS mRNA含量明顯降低

12、(P＜0.05)，且以去勢(shì)+低氧組大鼠肺組織eNOS mRNA含量降低更為明顯(P＜0.01);而假手術(shù)+低氧組、去勢(shì)+E2組、去勢(shì)+2ME組、去勢(shì)組大鼠肺組織eNOS mRNA含量與假手術(shù)組無(wú)明顯差異。
　　結(jié)論:
　　1、低氧環(huán)境下，大鼠血清中NO含量明顯減少。擁有完整卵巢的大鼠及補(bǔ)充E2后的大鼠血清中NO含量有所增加，補(bǔ)充2ME后的大鼠血清中NO含量也有所增加，但效果不及補(bǔ)充E2。
　　2、低氧環(huán)境下，大鼠血清中