2-甲氧基雌二醇脂質(zhì)體抗腫瘤藥效學研究.pdf

1、2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradio，2-ME)是一種甾體激素類化合物，屬新型激素類抗腫瘤藥物，為17β-雌二醇的內(nèi)源性代謝產(chǎn)物。自20世紀90年代以來，大量體內(nèi)外研究表明，2-ME具有抗增殖、抗細胞凋亡、抗血管生成等多重作用，證實了它在腫瘤治療中的價值。體內(nèi)試驗中，對于惡性肉瘤、乳腺癌、多發(fā)性骨髓瘤、前列腺癌、宮頸癌、黑色素瘤、肺癌、胰腺癌、惡性內(nèi)皮細胞瘤及造血系統(tǒng)腫瘤白血病等顯示出抗腫瘤生長和抗血管新生的作用。臨床前

2、動物腫瘤模型實驗顯示2-ME在治療劑量下具有毒性低、耐受性好的優(yōu)點。雖然2-ME的抗腫瘤作用機制并未完全闡明，但是臨床實驗和動物模型研究證明，其抗腫瘤作用并不依賴于雌性激素受體，而與破壞微管和抑制HIF，VEGF等細胞因子的表達有關(guān)。和其他甾體激素一樣，2-ME在水中的溶解度小，血藥濃度低。本研究考察了2-ME脂質(zhì)體(2-methoxyestradiolliposome，2-ME-L)對于S180腹水瘤、H22肝癌實體瘤和食管癌細胞EC

3、9706移植瘤的抗腫瘤作用，并初步探討了其抗腫瘤機理。本文的主要研究內(nèi)容摘要如下：
　　 1.2-ME-L對S180腹水瘤藥效學研究?？疾炝?-ME-L抑制腹水形成，控制腹水惡化和抑制腹水引起腹腔轉(zhuǎn)移癌的作用，并通過細胞周期和凋亡率的檢測初步探討2-ME影響腹水細胞周期變化和誘導細胞凋亡的作用。首先成功建立了S180腹水瘤模型，將荷瘤鼠隨機分為6組，每組20只，雌雄各半，空白脂質(zhì)體0.2ml·d-1為陰性對照組，5-氟尿嘧啶(5

4、-fluorouracil，5-FU)20mg·kg-1·d-1為陽性對照組，2-ME溶液組(2-ME Solution，2-ME-S)：22.5mg·kg-1·d-1；2-ME-L，高、中、低(30、22.5、15mg·kg-1·d-1)劑量組。分組24h后連續(xù)腹腔給藥7d，每2d測量腹圍，觀察荷瘤鼠行為體征，7d后每組隨機抽取半數(shù)荷瘤小鼠，頸椎脫臼處死，解剖觀察腹腔中主要臟器，稱重，取出肝臟用中性甲醛固定，常規(guī)切片進行病理檢查，收集

5、腹水，測量體積，計算細胞存活率，流式細胞術(shù)檢測2-ME-L對于癌細胞周期和凋亡的影響。剩余小鼠統(tǒng)計生存時間，計算生命延長率。研究結(jié)果顯示2-ME-L各濃度組小鼠能夠明顯延長S180荷瘤小鼠的生存時間，治療組腹水量降低，腹水中癌細胞數(shù)存活率下降，細胞凋亡率升高，病理切片結(jié)果顯示癌細胞較少在腹腔內(nèi)轉(zhuǎn)移，抑瘤作用顯示出明顯的劑量依賴性，2-ME-L將S180腹水瘤細胞阻滯在G2/M期，從而導致細胞的凋亡，2-ME的抗腫瘤作用可能與2-ME對細

6、胞周期影響有關(guān)。將同等劑量的2-ME-L與2-ME-S的抗腫瘤作用進行對比可得，2-ME-L的抑瘤作用更顯著，在治療中并未出現(xiàn)明顯的毒性反應，而生命延長率，肝臟指數(shù)等結(jié)果顯示，2-ME-S對實驗動物具有較大毒副作用。
　　 2.2-ME-L對H22肝細胞癌實體瘤的抑制作用研究?？疾炝?-ME對于腫瘤細胞的增殖抑制作用和對腫瘤組織內(nèi)部血管生成抑制作用。皮下注射腫瘤細胞建立H22肝癌實體瘤模型，將荷瘤鼠分為6組，每組10只，雌雄各半

7、，分別為：H22實體瘤模型組：生理鹽水0.2ml·d-1；陰性對照組：空白脂質(zhì)體0.2ml·d-1；陽性對照組：5-氟尿嘧啶(5-FU)20mg·kg-1·d-1；2-ME脂質(zhì)體高、中、低(30、22.5、15mg·kg-1·d-1)劑量組。分組24h后尾靜脈注射給藥，連續(xù)7d。給藥期間每2d測量腹圍，觀察荷瘤鼠行為體征，給藥結(jié)束后24h將小鼠全部處死，先測量腫瘤體積，然后完整剝離腫瘤組織，立即稱重。最后分別計算各組腫瘤體積抑制率(VI

8、R)和腫瘤重量抑制率(WIR)。瘤組織經(jīng)4％中性甲醛固定后，常規(guī)脫水、石蠟包埋，4μm切片，蘇木素-伊紅染色，普通光學顯微鏡下觀察組織病理變化。免疫組化染色檢測腫瘤內(nèi)部VEGF、Ki-67和CD34的表達。研究結(jié)果表明2-ME-L能夠抑制腫瘤的生長，抑制腫瘤細胞的增殖，并能夠抑制腫瘤組織內(nèi)部新生血管的生成，并顯示出明顯的劑量依賴性，2-ME-L可抑制腫瘤組織內(nèi)細胞增殖因子的表達，其抗腫瘤作用可能與癌細胞的增殖阻滯作用有關(guān)；2-ME-L可

9、減少腫瘤細胞內(nèi)部微血管密度，降低血管內(nèi)皮生長因子的表達，其抗腫瘤作用可能與體內(nèi)的抑制血管新生作用相關(guān)。陰性對照組和模型組各項指標統(tǒng)計結(jié)果沒有顯著性差異，推測空白脂質(zhì)體沒有治療作用。
　　 3.2-ME-L對食管癌細胞EC9706裸鼠移植瘤的抑制作用，并初步探討其抗食管癌移植瘤的作用機制。將食管癌細胞EC9706的單細胞懸液注射入BALB/c裸小鼠的右背側(cè)腋部皮下，注射約兩周后皮下實體瘤形成，將荷瘤鼠隨機分為5組，每組3只，分別為

10、空白脂質(zhì)體0.2ml·d-1；陽性對照組：5-氟尿嘧啶(5-FU)20mg·kg-1·d-1；2-ME脂質(zhì)體高、中、低(30、22.5、15mg·kg-1·d-1)劑量組。分組24h后尾靜脈注射給藥治療，連續(xù)7d。給藥期間每2d測量腹圍，觀察荷瘤鼠行為體征，給藥結(jié)束后24h將小鼠全部處死，先測量腫瘤體積，然后完整剝離腫瘤組織，立即稱重。最后分別計算各組腫瘤體積抑制率(VIR)和腫瘤重量抑制率(WIR)。瘤組織經(jīng)4％中性甲醛固定后，常規(guī)脫

11、水、石蠟包埋，4μm切片，伊紅-蘇木素染色，普通光學顯微鏡下觀察組織病理變化。免疫組化染色的方法檢測腫瘤組織內(nèi)部VEGF，EGF，Ki-67和HIF-1a的表達情況，使用TUNEL法檢測腫瘤組織內(nèi)部細胞凋亡的情況，并對結(jié)果做出統(tǒng)計分析。結(jié)果顯示，2-ME-L可顯著抑制實體瘤的生長，并導致腫瘤內(nèi)部組織出現(xiàn)不同程度的壞死區(qū)，抑瘤作用具有明顯的劑量依賴性；通過免疫組化檢測結(jié)果可推測2-ME-L能夠抑制腫瘤組織內(nèi)皮細胞的增生，抑制癌細胞的增殖，