萘酰亞胺-多胺綴合物SLP4抗肝癌作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是全世界范圍內(nèi)與癌癥相關(guān)的最常見(jiàn)的死亡原因之一。通常情況下，肝癌患者早期沒(méi)有明顯癥狀，被診斷時(shí)多已發(fā)展到晚期階段，已不適合手術(shù)治療。因此，晚期肝癌治療方法的選擇受到極大的限制。此外，由于轉(zhuǎn)移率及術(shù)后復(fù)發(fā)率較高，肝癌患者的五年存活率不能令人滿意。因此，開(kāi)發(fā)新的抗肝癌藥物具有重要的意義。萘酰亞胺類化合物作為DNA嵌入劑，具有良好的抗腫瘤活性。天然多胺或合成的多胺類似物是一

2、種有效利用腫瘤細(xì)胞膜上多胺轉(zhuǎn)運(yùn)體的靶向載體，具有提高化合物靶向性和生物活性的能力。將萘酰亞胺與多胺綴合，可增加萘酰亞胺的水溶性和抗腫瘤活性，并使之具有較高的腫瘤細(xì)胞選擇性。本文對(duì)新型萘酰亞胺-多胺綴合物SLP4的抗肝癌作用及其分子機(jī)制進(jìn)行研究。
　　方法：
　　1、在細(xì)胞及動(dòng)物水平，評(píng)價(jià)SLP4對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的影響：
　　采用MTT法，在指定時(shí)間點(diǎn)（24h和48h）測(cè)定SLP4對(duì)肝癌細(xì)胞（SMMC-7721和Hep G

3、2細(xì)胞）增殖的抑制作用，并計(jì)算IC50值；使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)SLP4對(duì)肝癌細(xì)胞周期的影響；使用AO/EB和Rh123/Hoechst33342染色劑對(duì)上述細(xì)胞進(jìn)行染色，并利用高內(nèi)涵活細(xì)胞成像系統(tǒng)（HCS）考察SLP4對(duì)肝癌細(xì)胞凋亡的影響；使用AnnexinV/PI對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，并用流式細(xì)胞儀測(cè)定肝癌細(xì)胞的凋亡率；采用Western blot考察SLP4對(duì)細(xì)胞周期及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響；采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定SLP4對(duì)肝癌

4、細(xì)胞內(nèi)多胺含量的影響，并考察多胺含量的改變對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的影響；基于H22小鼠腋下移植肝癌模型，評(píng)價(jià)SLP4對(duì)肝癌實(shí)體瘤生長(zhǎng)的影響。
　　2、在細(xì)胞和動(dòng)物水平，考察SLP4對(duì)肝癌遷移和轉(zhuǎn)移的影響：
　　采用細(xì)胞劃痕法和Transwell小室實(shí)驗(yàn)，考察SLP4對(duì)肝癌細(xì)胞遷移的影響；采用Western blot法檢測(cè)SLP4對(duì)遷移相關(guān)蛋白表達(dá)的影響；基于H22小鼠肝癌肺轉(zhuǎn)移模型，評(píng)價(jià)SLP4對(duì)小鼠腫瘤肺轉(zhuǎn)移以及小鼠生存時(shí)間的影響

5、。
　　結(jié)果：
　　1、SLP4抑制肝癌細(xì)胞的增殖：
　　作用24h后，SLP4抑制SMMC-7721、Hep G2細(xì)胞增殖，IC50值分別為(17.5±0.95)μM、(19.4±1.35)μM；48h后，IC50值分別為(8.56±0.86)μM和(9.88±1.21)μM；SLP4將SMMC-7721和Hep G2細(xì)胞周期阻滯在G2/M期；SLP4同時(shí)誘導(dǎo)SMMC-7721和Hep G2細(xì)胞發(fā)生凋亡，凋亡率分別為

6、45.3％和46.8%；Western blot結(jié)果顯示SLP4上調(diào)SMMC-7721和Hep G2細(xì)胞內(nèi)p53、p21、CyclinB1、p-Cdc2、Bax、c-PARP1、SSAT的蛋白表達(dá)，下調(diào)Cdc2、Bcl-2、CyclinD1的蛋白表達(dá)；HPLC檢測(cè)結(jié)果顯示SLP4可以降低SMMC-7721和Hep G2細(xì)胞內(nèi)多胺的含量；此外，SLP4可顯著抑制荷H22肝癌細(xì)胞小鼠實(shí)體瘤的生長(zhǎng)，抑瘤率為58.63%。
　　2、SLP

7、4抑制肝癌的遷移和轉(zhuǎn)移：
　　細(xì)胞劃痕法和Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示SLP4抑制肝癌SMMC-7721和Hep G2細(xì)胞的遷移；Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示SLP4下調(diào)SMMC-7721和Hep G2細(xì)胞內(nèi)β-catenin、MMP7和N-cadherin的蛋白表達(dá)，上調(diào)E-cadherin的蛋白表達(dá)；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示SLP4可以抑制荷H22肝癌細(xì)胞小鼠的肺轉(zhuǎn)移，抑制轉(zhuǎn)移率為79.73%，并能延長(zhǎng)其中位生存時(shí)間。<