萘酰亞胺—多胺綴合物2A體外抗腫瘤作用機制研究.pdf

1、實驗目的:
　　多胺是一類廣泛存在于組織細胞內的天然的胺類物質,腫瘤的快速生長有賴于細胞內的多胺含量的大幅增長,遠遠超過其他正常組織細胞,而天然多胺可以作為一種載體通過多胺轉運系統(tǒng)進入細胞內。研究證明,在共價多胺鏈上綴合上一個細胞毒類藥物,也能被轉運至細胞內,而發(fā)揮高選擇性的抗腫瘤作用。萘酰亞胺類化合物對DNA有良好的嵌入性能,腫瘤細胞與正常細胞的DNA存在差異性,可以起到一個靶向作用。本文對新型的萘酰亞胺-多胺綴合物2A的抗腫瘤

2、活性進行了研究,并探討其作用機制。
　　實驗方法:
　　以人肝癌細胞HepG2為研究對象,先通過基因轉染把Akt1基因轉入HepG2細胞內,通過細胞生長能力檢測,克隆形成檢測,細胞運動能力檢測來研究Akt1基因對細胞的作用。通過MTT法來檢測2A的抗腫瘤活性,通過AO/EB/Hoechst33342,PI/Hoechst33342,RH123/Hoechst33342,Lyso-Tracker Red/Hoechst3334

3、2,熒光染色法檢測2A對細胞的凋亡的影響;通過transwell小室實驗,研究2A對細胞遷移和侵襲的影響;通過免疫印跡法來檢測Caspases家族,Bcl-2家族,細胞色素c,MMPs家族等相關的蛋白的表達,并對其相互關系進行了分析。
　　實驗結果:
　　轉染Akt1的HepG2細胞與未轉染的HepG2細胞相比,細胞生長,增殖,運動能力都有所提高。通過2A對兩種細胞處理,發(fā)現(xiàn)都有生長抑制作用,對HepG2細胞的IC50值是(

4、12.03±0.21)μM,對HepG2-Akt1細胞的IC50值是(19.68±1.54)μM。轉染的HepG2肝癌細胞對于藥物有更好的耐受,并且凋亡呈時間劑量依賴性。通過transwell小室的遷移和侵襲實驗發(fā)現(xiàn)2A可以抑制肝癌細胞的遷移和侵襲,并呈現(xiàn)時間劑量依賴性。通過染色觀察2A會誘導腫瘤細胞發(fā)生凋亡。免疫印跡實驗結果表明2A引起Caspases家族的活化,細胞色素c的表達增多,Bcl-2家族參與了凋亡的過程,VEGF蛋白的下調