杏花雨注射液的體外抗腫瘤作用及其作用機(jī)制研究.pdf

1、杏花雨注射液是新研制的銀杏葉提取物注射液，其黃酮苷含量為49.79％，萜烯為4.4％。已有許多文獻(xiàn)報(bào)道黃酮類(lèi)化合物有較好的抗腫瘤活性，杏花雨注射液作為銀杏葉提取物其中含有豐富的黃酮類(lèi)物質(zhì)，居各類(lèi)物質(zhì)含量之首。因此，其在抗腫瘤方面可能具有很大潛力。本實(shí)驗(yàn)旨在研究杏花雨注射液對(duì)小鼠肝癌H<,22>細(xì)胞增殖的影響，并進(jìn)一步探討其作用機(jī)理，從而為其更好的應(yīng)用于臨床提供客觀而科學(xué)的依據(jù)。 1 杏花雨注射液的體外抗腫瘤作用 體外MT

2、T實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用杏花雨注射液22、44、88、175、350 mg·L<'-1>的濃度處理H<,22>細(xì)胞3 d，對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖抑制率分別為(1.54±0.25)％，(13.55±0.89)％，(32.67±2.69)％，(81.05±0.5)％，(90.18±2.63)％，與對(duì)照組相比該藥能明顯抑制H<,22>細(xì)胞的增殖(P<0.05)，其IC<,50>值為(113.53±6.49)mg·L<'-1>，并呈現(xiàn)明顯的濃度效應(yīng)關(guān)系。臺(tái)盼

3、藍(lán)排斥法觀察杏花雨注射液對(duì)H<,22>細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線的影響，同樣發(fā)現(xiàn)杏花雨注射液對(duì)H<,22>細(xì)胞的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，也呈現(xiàn)明顯的濃度效應(yīng)關(guān)系。說(shuō)明杏花雨注射液在體外有明顯的抗腫瘤活性。 2 杏花雨注射液對(duì)腫瘤細(xì)胞周期的影響 采用流式細(xì)胞儀分析了杏花雨注射液對(duì)H<,22>細(xì)胞周期移行的影響。經(jīng)不同濃度的杏花雨注射液(22～350 mg·L<'-1>)作用細(xì)胞24小時(shí)后，S期細(xì)胞的比例顯著下降，G<,2>期細(xì)胞的比例明

4、顯增加，且G<,2>期細(xì)胞具有明顯的濃度效應(yīng)關(guān)系，說(shuō)明杏花雨注射液將H<,22>細(xì)胞分裂阻滯于G<,2>/M期，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。 3 杏花雨注射液誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡 用Giemsa，染色、AO/EB熒光染色方法分別觀察了不同濃度杏花雨注射液(22～350 mg·L<'-1>)作用于H<,22>細(xì)胞24小時(shí)后的形態(tài)變化。Giemsa染色將H<,22>細(xì)胞核染成藍(lán)紫色，胞漿染成粉紅色。未加藥組的細(xì)胞核染色均一、結(jié)構(gòu)完整；給

5、藥組細(xì)胞呈現(xiàn)核聚集和碎裂。AO/EB雙熒光染色法觀察，既有細(xì)胞核染橘紅色，呈致密斑塊或碎片狀晚期凋亡細(xì)胞和核膜完整，染色質(zhì)染均勻的紅色壞死細(xì)胞。并且隨著杏花雨注射液濃度的變化愈來(lái)愈明顯，表明凋亡細(xì)胞的比例逐漸增加。DNA凝膠電泳實(shí)驗(yàn)中，杏花雨注射液作用H<,22>細(xì)胞24小時(shí)后，提取DNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，呈現(xiàn)典型的“DNA梯型條帶”(DNA ladder)。流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞的DNA含量測(cè)定，可見(jiàn)經(jīng)不同濃度的杏花雨注射液(22～35

6、0 mg·L<'-1>)作用H<,22>細(xì)胞24小時(shí)后，出現(xiàn)一個(gè)“G<,1>亞峰”，且凋亡細(xì)胞的比例隨著杏花雨注射液濃度的升高而增加，呈一定的劑量依賴(lài)性。從以上三方面的結(jié)果可以認(rèn)為杏花雨注射液能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。 4 杏花雨注射液對(duì)凋亡相關(guān)基因p53、Bcl-2蛋白表達(dá)的影響 本文觀察了杏花雨注射液對(duì)凋亡相關(guān)基因p53、Bcl-2蛋白表達(dá)的影響。經(jīng)不同濃度的杏花雨注射液(22～350mg·L<'-1>)作用H<,22