萘內(nèi)酰胺-多胺綴合物TRG9抗腫瘤作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景：肝細(xì)胞癌是最常見的惡性腫瘤之一，在世界范圍內(nèi)，其致死率在腫瘤相關(guān)疾病中排名第三位。近年來雖然早期診斷，以及放療、化療和手術(shù)治療的聯(lián)合使用使肝癌的治療有了一定的提高，然而，到目前為止，肝癌患者的預(yù)后仍然不容樂觀?；熓侵委熌[瘤的重要手段之一?；熕幬锏闹饕毕菔侨狈δ[瘤細(xì)胞選擇性，將藥效基團(tuán)與多胺基團(tuán)結(jié)合，形成多胺綴合物，可提高藥效團(tuán)與腫瘤細(xì)胞的親和力，進(jìn)而具有腫瘤細(xì)胞選擇性。萘內(nèi)酰胺及其衍生物是DNA嵌入劑，具有顯著的抗腫瘤活性。

2、將萘內(nèi)酰胺與多胺綴合，可增加萘內(nèi)酰胺的水溶性和抗腫瘤活性，并使之具有腫瘤細(xì)胞選擇性。因此，開發(fā)具有靶向性轉(zhuǎn)運(yùn)萘內(nèi)酰胺進(jìn)入腫瘤細(xì)胞的萘內(nèi)酰胺-多胺綴合物是當(dāng)今化療研究領(lǐng)域中一個新的熱點(diǎn)。然而，對萘內(nèi)酰胺-多胺綴合物抗腫瘤機(jī)制的研究尚不廣泛，其機(jī)制尚未完全澄清，近些年來經(jīng)過對多胺的修飾合成的多胺綴合物在抗癌方面的應(yīng)用引起了人們的廣泛關(guān)注，研究表明：天然或合成多胺有潛力發(fā)展成為一種有效利用細(xì)胞膜上多胺轉(zhuǎn)運(yùn)體的勒向載體，它們可能具備提高化合物細(xì)

3、胞選擇性和生物活性的能力。萘酰亞胺類化合物在抗癌類藥物研究方面，己經(jīng)發(fā)現(xiàn)一些經(jīng)典化合物，如氨萘菲特(Amonafide)和米托萘胺(mitonafide)，氨萘菲特已處于III期臨床試驗(yàn)。但在臨床試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)很多不足之處，如具有神經(jīng)毒性、骨髓抑制以及對不同腫瘤表現(xiàn)出差異性等。大量實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)萘酰亞胺類化合物能夠在抗腫瘤方面，表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用，同時在抑制腫瘤轉(zhuǎn)移方面也有較好的作用，對萘酰亞胺類衍生物進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾的目的是增加療效以及減少毒性等

4、不良反應(yīng)，增加該類化合物對腫瘤細(xì)胞的靶向作用。
　　目的:本文以肝癌細(xì)胞SMMC-7721、Hep G2為研究對象，以期探討萘內(nèi)酰胺-多胺綴合物TRG9在肝癌細(xì)胞中的生物學(xué)功能及其潛在的作用機(jī)制。
　　方法:通過MTT法來檢測TRG9的抗腫瘤活性，通過AO/EB，Annexin V-FITC/PI熒光染色法檢測TRG9對細(xì)胞的凋亡的影響；通過transwell小室實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)，研究TRG9對細(xì)胞遷移的影響；通過免疫印跡法來

5、檢測Caspases家族，Bcl-2家族，PARP，MMP家族等相關(guān)的蛋白的表達(dá)，并對其相互關(guān)系進(jìn)行了分析。通過小鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)檢測TRG9對實(shí)體瘤以及小鼠肺轉(zhuǎn)移活性的影響。
　　結(jié)果:目前的數(shù)據(jù)表明TRG9抑制兩種肝癌細(xì)胞SMMC-7721以及Hep G2，通過對兩種細(xì)胞處理48h，發(fā)現(xiàn)都有生長抑制作用，對SMMC-7721細(xì)胞的IC50值是(3.30±1.92)μM，對Hep G2細(xì)胞的IC50值是(3.51±1.36)μM，相應(yīng)

6、的，陽性化合物氨萘菲特IC50值分別為(13.47±2.28)μM，(6.57±1.39)μM。兩種肝癌細(xì)胞對于TRG9不耐受，并且凋亡呈時間劑量依賴性。通過transwell小室的遷移實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)TRG9可以抑制肝癌細(xì)胞的遷移，并呈現(xiàn)劑量依賴性。通過染色觀察 TRG9會誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。免疫印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明TRG9引起Caspases家族的活化，Caspases-3的表達(dá)增多，Bcl-2家族參與了凋亡的過程，Bcl-2蛋白的下調(diào)，Ba