萘酰亞胺衍生物 TZY2抑制肝癌的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：本論文以本實(shí)驗(yàn)室合成的新的萘酰亞胺衍生物 TZY2為研究對(duì)象，利用肝癌細(xì)胞SMMC-7721和Hep G2細(xì)胞模型和荷瘤小鼠動(dòng)物模型，探討TZY2體內(nèi)外的抗肝癌作用及作用機(jī)制。
　　方法：MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TZY2對(duì)肝癌SMMC-7721細(xì)胞和Hep G2細(xì)胞增殖的影響。AO/EB染色后采用高內(nèi)涵成像系統(tǒng)觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；Annexin V/PI雙染后采用流式細(xì)胞儀分析TZY2對(duì)細(xì)胞凋亡的影響；PI單染后采用流式細(xì)胞儀分析T

2、ZY2對(duì)細(xì)胞周期分布的影響；Rh123染色后分別采用高內(nèi)涵成像系統(tǒng)和流式細(xì)胞儀檢測(cè)線粒體膜電位的變化；以DCFH-DA為熒光探針，采用高內(nèi)涵成像系統(tǒng)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧含量的變化。采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察TZY2對(duì)肝癌細(xì)胞遷移的影響。采用Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TZY2作用于Hep G2和SMMC-7721細(xì)胞24h、48h后，對(duì)PARP-1、Caspase-8、Bcl-2、p53等相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。采用昆明小鼠H22腋下實(shí)體瘤、H2

3、2肺轉(zhuǎn)移以及BALB/c小鼠結(jié)腸癌CT-26肺轉(zhuǎn)移三種荷瘤動(dòng)物模型研究TZY2對(duì)實(shí)體腫瘤生長(zhǎng)以及肺轉(zhuǎn)移的影響。
　　結(jié)果：TZY2劑量依賴性的抑制肝癌細(xì)胞SMMC-7721和Hep G2細(xì)胞的增殖，48h的IC50分別為(3.3±1.01)μM、(8.75.±0.74)μM。AO/EB染色、Annexin V/PI雙染和Rh123染色實(shí)驗(yàn)均表明TZY2能夠誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞和Hep G2細(xì)胞凋亡和線粒體膜電位下降，且呈時(shí)間

4、和濃度依賴性。Western Blot結(jié)果表明TZY2激活p53、PARP-1、Caspase-8、Caspase-3，上調(diào)Bax的表達(dá)及下調(diào)Bcl-2的表達(dá)，并促進(jìn)cytochrome C從線粒體釋放到細(xì)胞漿。此外，TZY2抑制細(xì)胞的遷移能力并下調(diào)β-catenin的表達(dá)。
　　昆明小鼠H22腋下移植實(shí)體瘤和H22肺轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)均顯示TZY2可以抑制腫瘤生長(zhǎng)和肺轉(zhuǎn)移，抑制率分別是48.99％和61.80%。此外，TZY2抑制CT-2