GM-CSF對(duì)糖尿病大鼠創(chuàng)面愈合過(guò)程中BCL-2表達(dá)水平的影響.pdf

1、目的:傷口愈合是一種進(jìn)化上保守的,復(fù)雜的多細(xì)胞的過(guò)程。這一過(guò)程涉及多種細(xì)胞類型,包括角質(zhì)形成細(xì)胞,成纖維細(xì)胞,內(nèi)皮細(xì)胞,巨噬細(xì)胞和血小板的協(xié)調(diào)努力。糖尿病(diabetes)是由遺傳因素、免疫功能紊亂、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各種致病因子作用于機(jī)體導(dǎo)致胰島功能減退、胰島素抵抗等而引發(fā)的糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列代謝紊亂綜合征。因?yàn)樘悄虿∫鸬闹車窠?jīng)性病變、微血管病變是糖尿病患者創(chuàng)面難以愈合的病理基礎(chǔ)。粒細(xì)

2、胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)是一個(gè)多能生長(zhǎng)因子,在傷口愈合的過(guò)程中起著重要作用。它能誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞及單核/巨噬細(xì)胞分化、增殖并活化;提高創(chuàng)面抗感染能力;促進(jìn)壞死組織脫落;加強(qiáng)造血前體細(xì)胞增殖;趨化、激活內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及角質(zhì)細(xì)胞,促進(jìn)其分化、增殖,使新生血管、肉芽組織形成及上皮細(xì)胞遷移、增殖的時(shí)間進(jìn)一步加快;有利于促愈合因子的分泌、創(chuàng)面縮小及組織重塑。這么廣泛的作用引起了國(guó)內(nèi)外專家學(xué)者的關(guān)注,他們將GM-CSF應(yīng)用于多種創(chuàng)

3、面,如腫瘤、糖尿病、皮膚病、外科手術(shù)術(shù)后難愈性創(chuàng)面和深度燒傷、靜脈性潰瘍腫瘤的放化療等多種不愈性創(chuàng)面,加快其愈合。因?yàn)樵趧?chuàng)面愈合過(guò)程中角質(zhì)形成細(xì)胞,成纖維細(xì)胞,內(nèi)皮細(xì)胞,巨噬細(xì)胞和血小板發(fā)揮著及其重要的作用,而GM-CSF在其間起著催化、激活和活化各種細(xì)胞的作用,所以我們認(rèn)為GM-CSF在糖尿病的創(chuàng)面愈合中會(huì)起到一定作用。我們通過(guò)實(shí)驗(yàn)對(duì)糖尿病大鼠模型創(chuàng)面的Bcl-2表達(dá)情況來(lái)簡(jiǎn)單探討一下在糖尿病創(chuàng)面愈合過(guò)程中應(yīng)用粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因

4、子的作用。
　　 方法:SPF級(jí)大鼠60只,體重(290±15)g,雌雄不限。在高脂高糖環(huán)境下喂養(yǎng)4周后準(zhǔn)備造模,造模前禁食12小時(shí),不禁水。STZ用新配制的0.1mmol/L,檸檬酸緩沖液PH=4.2稀釋。一次性腹腔注射STZ小劑量35mg/kg。血糖穩(wěn)定時(shí)間約48h-72h。大鼠出現(xiàn)三多癥狀,體重增加。隨即在尾靜脈抽血檢測(cè),血糖值大于11mmol/L以上。取血糖和體重符合標(biāo)準(zhǔn)的大鼠進(jìn)行胰島病理檢測(cè)證明胰島細(xì)胞無(wú)破壞表明造模成

5、功。隨機(jī)抽取造模成功后45只大鼠,先將大鼠腹腔麻醉后背部剃毛,在背部中線兩側(cè)各制作1.5cm×1.5cm創(chuàng)面,創(chuàng)面剪開(kāi)皮膚全層,至皮下筋膜層,無(wú)菌敷料加蓋,每日換料一次。隨機(jī)將抽取的45只大鼠分為三組:A組為糖尿病(DM)創(chuàng)面組15只,B組為糖尿病+GM-CSF創(chuàng)面組15只(方法為將大鼠麻醉后,腹腔注入GM-CSF),C組糖尿病+稀釋劑創(chuàng)面組15只(方法為將大鼠麻醉后,腹腔注入稀釋劑)。大鼠每5只分籠飼養(yǎng)。肉眼觀察各組大鼠術(shù)后第3、5、

6、8、12、18天創(chuàng)面組織愈合情況,將大鼠腹腔麻醉后稱重,在尾靜脈抽血檢測(cè)血糖值,同時(shí)記錄每只大鼠的體重,空腹血糖。利用透明方格紙方法測(cè)得第3、5、8、12、18天的創(chuàng)面愈合面積,同時(shí)計(jì)算創(chuàng)面愈合率。沿愈合創(chuàng)面外緣超出約0.5cm切下創(chuàng)面組織,制片后光鏡觀查創(chuàng)面各類細(xì)胞、血管成活情況。進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn),觀察創(chuàng)面BCL-2和CD34細(xì)胞染色的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:60只大鼠生存57只,死亡3只,死亡原因考慮為在制作創(chuàng)面時(shí)麻藥過(guò)量。

7、生存大鼠血糖,體重檢測(cè),8只補(bǔ)符合Ⅱ型糖尿病標(biāo)準(zhǔn),刪除其記錄數(shù)據(jù)。剩余49只,取其中45只納入研究范圍。肉眼觀察創(chuàng)面愈合結(jié)果:創(chuàng)面形成2天后各組大鼠傷口均開(kāi)始結(jié)痂。創(chuàng)面形成5天后DM+GM-CSF組較其它3組略有變化,效果不明顯。創(chuàng)面形成7天后從肉眼觀察DM+GM-CSF組較其他3組創(chuàng)面愈合情況較為明顯好轉(zhuǎn)。其愈合情況好壞依次為:DM+GM-CSF組,DM+稀釋液組,糖尿病組。創(chuàng)面形成8天時(shí)DM+GM-CSF組創(chuàng)面基本愈合,其他2組略有

8、差別。創(chuàng)面形成18天后DM+GM-CSF組創(chuàng)面全部愈合,其他2組基本愈合,DM組愈合率較前2組差。免疫組化觀察結(jié)果是:BCL-2:DM+GM-CSF組較其它兩組肉芽組織明顯增厚。肉芽組織由大量的成纖維細(xì)胞,膠原纖維和毛細(xì)血管組成。在DM+稀釋液組的成纖維細(xì)胞的胞漿和毛細(xì)血管的內(nèi)皮細(xì)胞可見(jiàn)大量的BCL-2陽(yáng)性表達(dá)。在糖尿病組中偶可見(jiàn)BCL-2的陽(yáng)性表達(dá)。CD34:DM+GM-CSF組可見(jiàn)大量的棕黃色顆粒染色,同時(shí)存在大量的血管。DM+稀釋