穿心蓮有效部位抑制MCF-7-ADM細(xì)胞的機(jī)制研究.pdf

1、在我國(guó)，乳腺癌居女性惡性腫瘤的首位?；瘜W(xué)藥物治療是腫瘤治療的主要手段之一，但腫瘤多藥耐藥現(xiàn)象的出現(xiàn)常常導(dǎo)致化療失敗。腫瘤細(xì)胞可通過多種機(jī)制產(chǎn)生多藥耐藥性，其中腫瘤代謝重編程賦予了腫瘤細(xì)胞生存的優(yōu)勢(shì)。然而，在腫瘤研究中，與臨床治療密切相關(guān)的腫瘤多藥耐藥研究卻未在腫瘤能量代謝方面得到特別的關(guān)注。除了化學(xué)藥物，在我國(guó)傳統(tǒng)中藥因其低毒有效而被用于腫瘤的治療。中藥穿心蓮是爵床科植物穿心蓮(Andrographis paniculata(Burm.

2、f.) Nees)的干燥地上部分，以穿心蓮內(nèi)酯為代表的二萜內(nèi)酯類化合物是其主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，具有廣譜的抗腫瘤作用。本課題采用現(xiàn)代技術(shù)富集得到穿心蓮有效部位(AEP)，擬以阿霉素(ADM)耐受乳腺癌MCF-7/ADM為模型探究穿心蓮有效部位(AEP)抗腫瘤多藥耐藥的作用，并試圖從調(diào)控腫瘤能量代謝的角度探討其抑制MCF-7/ADM細(xì)胞的作用機(jī)制。
　　本研究以人乳腺癌MCF-7和ADM耐受人乳腺癌MCF-7/ADM細(xì)胞為模型，采用MT

3、T法考察AEP和AEP中含有的四種主要的二萜內(nèi)酯類成分(A、DDA、DA和NA)及其混合物AMP對(duì)這兩種細(xì)胞增殖的影響；在光學(xué)顯微鏡下觀察腫瘤細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；利用DAPI單染法、AO/EB雙染法和Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞核的形態(tài)學(xué)變化和腫瘤細(xì)胞死亡情況；利用Western Blot方法以PKM2和FASN為靶點(diǎn)分別探究AEP對(duì)MCF-7和MCF-7/ADM細(xì)胞有氧糖酵解和脂肪酸從頭合成途徑的影響，并考察AE

4、P對(duì)procaspase-3表達(dá)水平和Bcl-2/Bax比值的影響。MTT結(jié)果表明，A對(duì)兩種細(xì)胞的IC50分別是7.63±1.24、4.96±1.00μg/mL(48 h)和3.81±0.79、2.52±0.18μg/mL(72 h)，其對(duì)兩種腫瘤細(xì)胞均具有強(qiáng)烈的增殖抑制作用。AEP作用48 h、72 h后，對(duì)兩種腫瘤細(xì)胞的IC50分別是28.24±1.68、14.55±2.15μg/mL和17.08±1.68、8.10±1.23μg/

5、mL。作用相同時(shí)間，AEP對(duì)MCF-7細(xì)胞的增殖抑制作用與DDA、DA、NA和AMP沒有顯著性差異(P>0.05)，但AEP對(duì)MCF-7/ADM細(xì)胞增殖的抑制作用明顯優(yōu)于MCF-7細(xì)胞(P<0.01)。而DDA和DA對(duì)MCF-7/ADM細(xì)胞的抑制作用顯著弱于MCF-7細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：AEP作用48 h后，隨著濃度增大，MCF-7和MCF-7/ADM貼壁細(xì)胞數(shù)目逐漸減少，并出現(xiàn)細(xì)胞皺縮變圓，核染色質(zhì)濃縮，凋亡小體形成等典

6、型的細(xì)胞凋亡特征。同時(shí)，當(dāng)AEP的濃度為15～40μg/mL時(shí)，MCF-7/ADM細(xì)胞也出現(xiàn)橙色染色質(zhì)碎片彌漫分布的細(xì)胞壞死的特征。Annexin V-FITC/PI雙染實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明AEP能夠誘導(dǎo)MCF-7和MCF-7/ADM細(xì)胞凋亡，且當(dāng)濃度為40μg/mL時(shí)， AEP能夠顯著引起MCF-7/ADM細(xì)胞發(fā)生壞死，細(xì)胞壞死率為42.80％。當(dāng)AEP濃度為5、10、15μg/mL時(shí)，MCF-7細(xì)胞中的PKM2、FASN、procaspa

7、se-3與空白對(duì)照組相比未見明顯變化；當(dāng)AEP濃度增大至20、40μg/mL時(shí)，上述三種蛋白的表達(dá)水平明顯降低。相較MCF-7細(xì)胞而言，MCF-7/ADM細(xì)胞中的上述三種蛋白的表達(dá)更易受AEP影響。當(dāng)AEP僅為5μg/mL時(shí)，MCF-7/ADM細(xì)胞中PKM2、FASN、procaspase-3的表達(dá)水平即明顯降低。當(dāng)AEP濃度繼續(xù)增大時(shí)，加藥組中的上述三種蛋白表達(dá)量更低。然而，AEP對(duì)兩種細(xì)胞中Bcl-2/Bax比值影響較小。僅當(dāng)AEP