角毛殼葡聚糖酶基因的克隆和在畢赤酵母中的表達(dá).pdf

1、中國(guó)是個(gè)農(nóng)業(yè)大國(guó),農(nóng)藥的用量巨大,且以化學(xué)農(nóng)藥為主。化學(xué)農(nóng)藥的長(zhǎng)期使用會(huì)造成一系列的環(huán)境問(wèn)題和食品安全問(wèn)題,如易誘發(fā)抗藥性,易產(chǎn)生劑量依賴,專一性差而破壞生態(tài)結(jié)構(gòu)等。隨著環(huán)保意識(shí)的提高,生物農(nóng)藥為此提供了行之有效而且綠色環(huán)保的解決方向。
　　毛殼菌(Chaetomiumspp)是一類具有生防能力的真菌,可以用來(lái)做微生物源生物農(nóng)藥。它可產(chǎn)生降解植物病原真菌的細(xì)胞壁的幾丁質(zhì)酶和葡聚糖酶,結(jié)合其它一些機(jī)制來(lái)有效抑制植物病原真菌生長(zhǎng)。

2、r>　　本研究旨在找到角毛殼菌的葡聚糖酶基因序列并測(cè)定其蛋白對(duì)植物病原菌的防治能力。
　　從角毛殼菌基因組中克隆到葡聚糖酶基因cgc,全長(zhǎng)1709bp,其中83bp-267bp是內(nèi)含子序列。生物信息學(xué)方法分析表明此基因序列共編碼541個(gè)氨基酸,前19氨基酸是信號(hào)肽序列,理論大小為55.6kDa。通過(guò)構(gòu)建重組質(zhì)粒pPIC9K-cgc,電轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115菌株中,篩選后得到4個(gè)Mut+陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子。誘導(dǎo)表達(dá)后得到目的蛋白在60kDa