脂多糖對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Robo4-Slit2信號(hào)通路及下游信號(hào)分子VE-cadherin表達(dá)的影響.pdf

1、目的:觀察不同時(shí)間及不同濃度脂多糖（LPS）對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs） Robo4、Slit2和VE-cadherin表達(dá)的影響，探討Robo4、Slit2和VE-cadherin在LPS誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的作用，同時(shí)為后續(xù)尋找膿毒血癥臨床診斷及治療靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法:體外培養(yǎng)HUVECs，分正常對(duì)照組（37C、5％CO2培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)24 h和48 h）和2個(gè)濃度LPS組（在正常對(duì)照組基礎(chǔ)上分別加入終濃

2、度為10ug/ml和100 ug/ml的LPS），每組重復(fù)實(shí)驗(yàn)6次。免疫熒光染色檢測(cè)Robo4蛋白表達(dá)，western blot檢測(cè)各組細(xì)胞Robo4、Slit2和VE-cadherin蛋白表達(dá)，RT-PCR檢測(cè)Robo4、Slit2和VE-cadherin mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果:高劑量LPS組HUVECs在24 h檢測(cè)Robo4、Slit2和VE-cadherin蛋白表達(dá)分別為0.48±0.08、0.75±0.11、0.64

3、±0.12，較正常對(duì)照組1.36±0.11、1.64±0.17、1.55±0.15明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；高劑量LPS組HUVECs在48 h檢測(cè)Robo4、Slit2和VE-cadherin蛋白表達(dá)分別為0.20±0.04、0.32±0.09、0.27±0.09，較24 h表達(dá)明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；高劑量LPS組HUVECs在24 h檢測(cè)Robo4、Slit2和VE-cadherin mRNA

4、表達(dá)分別為0.23±0.06、0.21±0.09、0.20±0.07，較正常對(duì)照組0.97±0.13、0.89±0.12、0.85±0.13明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；高劑量 LPS組 HUVECs在48 h檢測(cè) Robo4、Slit2和VE-cadherin mRNA表達(dá)分別為0.10±0.04、0.10±0.05、0.08±0.03，較24 h表達(dá)明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；低劑量 LPS組在24 h

5、和48 h檢測(cè)Robo4、Slit2和VE-cadherin蛋白表達(dá)較正常對(duì)照組均有下降趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；低劑量LPS組在24 h和48 h檢測(cè)Robo4、Slit2和VE-cadherin mRNA表達(dá)較正常對(duì)照組均有下降趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論:高劑量（100 ug/ml）LPS可下調(diào)HUVECs細(xì)胞Robo4/Slit2信號(hào)通路及其下游信號(hào)分子VE-cadherin蛋白和基