水稻條紋病毒NSvc2蛋白在本氏煙中的亞細(xì)胞定位研究.pdf

1、水稻條紋病毒（Rice stripe virus，RSV）屬于纖細(xì)病毒屬（Tenuivirus），是引起水稻條紋葉枯病的病原物，病毒粒子呈長絲狀、無包膜，在介體灰飛虱（Laodelphaxstriatellus）體內(nèi)循回增殖且以持久方式經(jīng)卵傳播。RSV與布尼亞病毒科（Bunyaviridae）成員具有非常近的親緣關(guān)系，其編碼的NSvc2糖蛋白與布尼亞病毒科病毒的糖蛋白GP有很多相似之處。布尼亞病毒的糖蛋白定位到高爾基體并對于該科病毒形成

2、球形、有包膜的病毒粒子具有決定性作用。而RSV編碼同源糖蛋白NSvc2卻沒有形成具有包膜的球形病毒粒子，而且對NSvc2在寄主細(xì)胞中的行為特征研究甚少。為了回答上述問題，本文就RSV NSvc2糖蛋白在寄主本氏煙中的亞細(xì)胞內(nèi)的定位情況展開了系統(tǒng)的研究。首先將黃色熒光蛋白YFP融合于NSvc2-N、NSvc2-C和NSvc2蛋白的羧基端構(gòu)建載體NSvc2-N-YFP、NSvc2-C-YFP和NSvc2-YFP，通過農(nóng)桿菌共浸潤方法將其分別

3、與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)標(biāo)記物mCherry-HDEL和高爾基體標(biāo)記物Man49-mCherry注射于本氏煙（Njcotiana benthamiana）葉片細(xì)胞內(nèi)共表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)NSvc2-N-YFP在本氏煙細(xì)胞內(nèi)單獨(dú)表達(dá)時定位于高爾基體，而NSvc2-C-YFP在本氏煙細(xì)胞內(nèi)單獨(dú)表達(dá)時卻積累于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，并且當(dāng)兩者共同表達(dá)時NSvc2-C全部從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)聚集到高爾基體上，而且在膜蛋白酵母雙雜交體系中NSve2-N蛋白的確與NSve2-C蛋白互作;進(jìn)一步將

4、NSvc2-N-YFP或NSvc2-YFP與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輸出位點(diǎn)(ERES)標(biāo)記物共浸潤本氏煙發(fā)現(xiàn)NSvc2糖蛋白從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)到高爾基體的轉(zhuǎn)運(yùn)過程依賴于有功能的COPⅡ途徑，將二者與COPⅠ囊泡的標(biāo)記物Arf1-CFP共浸潤本氏煙時發(fā)現(xiàn)該轉(zhuǎn)運(yùn)過程同樣依賴有活性的逆行的運(yùn)輸途徑，即COPⅠ途徑。
　　本研究發(fā)現(xiàn)無包膜長絲狀的纖細(xì)病毒屬病毒RSV的糖蛋白在植物細(xì)胞中定位到高爾基體。鑒于布尼亞病毒科病毒的糖蛋白定位于高爾基體對有包膜的球狀病毒粒子