紅笛鯛清道夫受體B型Ⅰ類和抗凍蛋白Ⅱ型基因的克隆、表達與定量分析.pdf

1、本論文以紅笛鯛(Lutjanus sanguineus)為實驗對象,根據(jù)NCBI上已經(jīng)登錄的已知序列,設(shè)計特異性簡并引物,利用RACE技術(shù),獲得了道夫受體B型Ⅰ類(Scavenge Receptor class B typeⅠ,SR-BⅠ)和抗凍蛋白Ⅱ型(Antifreeze ProteinsⅡ,AFPⅡ)基因全長,并對其進行了生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明:SR-BⅠ基因的cDNA開放閱讀框長度為966bp,編碼一個由233個氨基酸殘基組成

2、的蛋白質(zhì),其分子量計算值為36.735kDa,理論等電點(PI)為8.75；紅笛鯛AFPⅡ基因的cDNA序列全長990bp,開放閱讀框(ORF)609bp,編碼一個由203個氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì),其分子量計算值為22.45kDa,理論等電點為5.52。
　　 在克隆AFPⅡ全長的基礎(chǔ)上,構(gòu)建了原核表達載體pET-AFPⅡ,將其導(dǎo)入大腸桿菌BL21后進行蛋白的表達條件的篩選。通過對誘導(dǎo)時間、IPTG濃度的優(yōu)化,最終確定AFPⅡ蛋

3、白在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達優(yōu)化條件為:IPTG濃度為0.7mmol/L,37℃誘導(dǎo)3h。
　　 用Real-time PCR對溶藻弧菌免疫后紅笛鯛S R-BⅠ基因在不同組織里的表達水平差異進行研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn),經(jīng)溶藻弧菌免疫后S R-BⅠ在紅笛鯛的頭腎、脾臟、肝臟、腸、心臟、胸腺組織中的表達量均有變化,其中腸中表達量明顯高于其他組織,肝臟次之,然后依次是頭腎、心臟、脾臟,胸腺中表達量最少。
　　 利用Real-time PCR

4、研究了水溫對.AFPⅡ表達量的影響。選擇3條健康紅笛鯛放入17℃養(yǎng)殖池中30min,以水溫25℃為對照組,提取頭腎、胸腺、肝臟、脾臟、鰓、腸六個組織總RNA,結(jié)果發(fā)現(xiàn),低溫刺激后各個組織的表達量均有所變化,腸和肝臟的AFPⅡ表達量都是實驗組大于對照組,而頭腎、胸腺、脾臟、鰓中則是對照組的表達量大于實驗組。
　　 本論文主要是在紅笛鯛SR-BⅠ和AFPⅡ基因的克隆和表達內(nèi)容上進行了研究與探討,實驗結(jié)果為紅笛鯛脂肪代謝疾病的防治提供