C型清道夫受體在日本囊對(duì)蝦先天免疫中的功能研究.pdf

1、無脊椎動(dòng)物主要依靠先天免疫系統(tǒng)抵御病原體的感染，在此過程中模式識(shí)別受體對(duì)病原微生物的識(shí)別是啟動(dòng)先天免疫反應(yīng)的關(guān)鍵步驟。在對(duì)蝦中，已發(fā)現(xiàn)的模式識(shí)別受體有十多種，但對(duì)C型清道夫受體及其功能了解的還不多。我們以日本囊對(duì)蝦Marsupenaeus japonicus為研究對(duì)象，發(fā)現(xiàn)了C型清道夫受體可以作為一種重要的模式識(shí)別受體促進(jìn)對(duì)蝦血細(xì)胞對(duì)病毒和多種細(xì)菌的吞噬作用以及調(diào)節(jié)抗菌肽基因的表達(dá)。
　　(1)C型清道夫受體通過增強(qiáng)對(duì)蝦血細(xì)胞的吞

2、噬作用提高宿主抗病毒的能力
　　至今已在多種無脊椎動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)有C型清道夫受體(SRC)的存在，然而SRC在抗病毒方面的研究報(bào)道還很少。在本研究中，我們首次從日本囊對(duì)蝦，M.japonicus，中克隆到了一種SRC基因，并將其命名為MjSRC。當(dāng)對(duì)蝦受到白斑綜合征病毒(WSSV)的刺激以后，MjSRC在mRNA以及蛋白水平呈顯著的上調(diào)表達(dá)。敲低MjSRC導(dǎo)致WSSV病毒的含量顯著增加。同時(shí)，過表達(dá)MjSRC會(huì)有效地提高血細(xì)胞的吞噬率

3、，從而降低對(duì)蝦體內(nèi)WSSV的含量。Pull-down實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明MjSRC可以與WSSV的囊膜蛋白VP19相互作用。透射電鏡的觀察結(jié)果顯示膠體金標(biāo)記的MjSRC胞外域可以附著在WSSV的囊膜表面。在受到WSSV刺激后，MjSRC可以形成三聚體并伴隨病毒的內(nèi)吞而進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，這類內(nèi)化過程依賴Mjβ-arrestin2的存在。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明MjSRC的胞內(nèi)域可以與Mjβ-arrestin2相互作用，進(jìn)而介導(dǎo)WSSV以網(wǎng)格蛋白依賴的方式進(jìn)

4、入細(xì)胞質(zhì)。進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)的病毒與溶酶體融合，當(dāng)注射溶酶體抑制劑（氯喹）以后，病毒的拷貝數(shù)顯著增加。本研究結(jié)果顯示MjSRC通過其胞外域識(shí)別并結(jié)合WSSV，啟動(dòng)血細(xì)胞的吞噬作用，從而清除對(duì)蝦體內(nèi)的病毒。本文首次報(bào)道了SRC作為一種模式識(shí)別受體參與對(duì)病毒吞噬和清除。
　　(2)MjSRC在對(duì)蝦抗細(xì)菌感染中的功能研究
　　我們進(jìn)一步研究了MjSRC作為模式識(shí)別受體參與細(xì)菌的的識(shí)別和清除的分子機(jī)制。當(dāng)對(duì)蝦受到弧菌（Vibrio angu

5、illarum）或金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）刺激以后，MjSRC的mRNA水平在血細(xì)胞中顯著上調(diào)表達(dá)。MjSRC的胞外域(MAM和CCP結(jié)構(gòu)域）具有體外結(jié)合不同細(xì)菌以及細(xì)菌來源多糖的功能。在敲低MjSRC表達(dá)的情況下，對(duì)蝦血細(xì)胞的細(xì)菌清除能力和吞噬率與對(duì)照組相比顯著下降。此外，MjSRC具有調(diào)節(jié)抗菌肽(AMPs)基因表達(dá)的功能。綜上所述，MjSRC通過增強(qiáng)對(duì)蝦的細(xì)胞免疫和體液免疫有效地保護(hù)對(duì)蝦免受細(xì)菌的