不可分型流感嗜血桿菌感染與生物膜的關(guān)系.pdf

1、第一部分 NTHi體外生物膜的形成
　　[目的]探討不可分型流感嗜血桿菌(Nontypeablehaemophilus influenzae，NTHi)生物膜(Biofilm，BF)體外的形成，為研究NTHi BF相關(guān)感染發(fā)生機制奠定基礎(chǔ)。
　　[方法]以NTHi標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC49247為BF建立對象，銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)BF陽性菌株ATCC27853為陽性質(zhì)控，兩菌分別培養(yǎng)2

2、、3、4、7天后，分別采用結(jié)晶紫法、平板計數(shù)法觀察兩者BF的生長狀態(tài)，并在第4天采用掃描電鏡(Scanningelectron microscope，SEM)觀察生物膜的結(jié)構(gòu)特點。
　　[結(jié)果]結(jié)晶紫法BF的吸光度NTHi前4天由0.0591±0.0013升至0.269±0.0028 vs.PA0.0634±0.0016升至0.332±0.0028，隨后下降，至第7天NTHi BF吸光度降至0.1135±0.0021 vs.PA0

3、.1265±0.0050。空白對照為0.0365±0.0028平板計數(shù)法NTHi前4天BF內(nèi)活菌數(shù)由(0.530±0.028)×107 cfu/ml升至(2.275±0.0212)×107cfu/ml，至第7天降至(1.036±0.0198)×107 cfu/ml。PA相應(yīng)時間點的活菌數(shù)由(0.55±0.014)×107cfu/ml至(3.705±0.021)×107 cfu/ml，第7天降至(1.405±0.035)×107cfu/m

4、l，各時間點之間，結(jié)晶紫法細(xì)菌與空白對照之間有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。除第4天(P<0.05)外，其余天數(shù)兩菌之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。SEM第4天結(jié)果顯示細(xì)菌能形成典型的BF。
　　[結(jié)論]NTHi體外可形成BF。結(jié)晶紫法、平板計數(shù)法和掃描電鏡可用于BF常規(guī)檢測。
　　第二部分兒童NTHi感染常見疾病與體外生物膜的關(guān)系
　　[目的]探討兒童NTHi感染常見疾病體外生物膜的差異性，為明確BF在不同疾病中發(fā)揮

5、的作用奠定基礎(chǔ)。
　　[方法]選取臨床鼻竇炎、中耳炎、肺炎和支氣管炎四種疾病，呼吸道分離的80株不可分型流感嗜血桿菌以及標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC49247為研究對象，連續(xù)培養(yǎng)5天時間，結(jié)晶紫法檢測吸光度的大小，第2天的BF結(jié)果經(jīng)掃描電鏡觀察確認(rèn)。
　　[結(jié)果]臨床菌株結(jié)晶紫法BF平均吸光度第一天為0.3056±0.021838，第2天最高為0.5516±0.04653，至第5天BF大部分解聚，吸光度為0.2554±0.02229，而

6、標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC49247第一天吸光度僅為0.0305±0.0007，至第4天才達(dá)峰值，吸光度為0.255±0.0339，第5天開始解聚，吸光度為0.1945±0.0057。各疾病組之間第2天BF吸光度分別為中耳炎0.67477±0.064936，肺炎0.62190±0.057424，支氣管炎0.44705±0.015081，鼻竇炎0.43817±0.017277，第5天BF吸光度為：中耳炎0.32559±0.031621，肺炎0.27

7、371±0.024501，支氣管炎0.22098±0.013289，鼻竇炎0.17689±0.028316。各疾病組比較，除支氣管炎和鼻竇炎之間無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)以外，其余各組之間、各時間點之間吸光度均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)
　　[結(jié)論]不同感染疾病BF有差異。其中，BF在中耳炎發(fā)揮功能最大，肺炎次之，鼻竇炎支氣管炎最弱。
　　第三部分 NTHi感染致炎蛋白E與生物膜的關(guān)系
　　[目的]探討不可分型流感

8、嗜血桿菌感染促炎蛋白E(Protein E，PE)與體外BF形成的關(guān)系，為BF的干預(yù)形成奠定基礎(chǔ)。
　　[方法]從300個鼻竇炎和中耳炎中兒童患者中分離NTHi共59株，其中鼻竇炎36株，中耳炎23株。采血進行白細(xì)胞計數(shù)評估炎癥狀況。設(shè)置2天、3天、4天、5天共4個時間點，提取樣本BF和浮游狀態(tài)的總RNA，RT-PCR方法觀察pe以及l(fā)uxSmRNA的表達(dá)。
　　[結(jié)果]NTHi的pe mRNA與WBC具有相關(guān)性(P<0.0