流感嗜血桿菌BAM復(fù)合物的結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究.pdf

1、流感嗜血桿菌是一種革蘭氏陰性菌。外膜蛋白的合成需要蛋白前體通過(guò)Sec通路穿過(guò)細(xì)菌內(nèi)膜。而后在外膜脂雙分子層上完成最終的鑲嵌并折疊的過(guò)程，該過(guò)程大多需要有一個(gè)被稱為β-桶狀組裝機(jī)器（β-barrel Assembly Machinery，BAM)的外膜蛋白復(fù)合物協(xié)助。BAM以及它的同源系統(tǒng)，在原核和真核細(xì)胞中廣泛存在。在大腸桿菌中，BAM復(fù)合物含有五個(gè)蛋白組分：BamA(外膜孔道蛋白)，以及四個(gè)膜錨定蛋白BamB、BamC、BamD和Ba

2、mE。有趣的是，在流感嗜血桿菌中只含有其中四個(gè)組分：Bam A、BamC、BamD和BamE。
　　直到現(xiàn)在，關(guān)于流感嗜血桿菌中BAM復(fù)合物的結(jié)構(gòu)研究依舊匱乏。在我的碩士生階段，我希望能夠?qū)@一未知領(lǐng)域進(jìn)行探索，這也有助于我更好地了解這一不局限于流感嗜血桿菌的古老系統(tǒng)。到目前為止，我已經(jīng)克隆了BamD29-262到pET-15b中，BamC18-215、BamC45-215以及一系列的BamA POTRA片段到pET-32m中，并

3、在BL21(DE3)或者B834(用于硒代甲硫氨酸取代型蛋白)進(jìn)行表達(dá)。獲得了BamD29-262晶體并且衍射到了4?。為了改善分辨率，我嘗試了BamC和BamD的共結(jié)晶并獲得了晶體，BamD29-262/BamC18-215復(fù)合物衍射分辨率最高達(dá)到3.8?。BamD29-262/BamC45-215復(fù)合物分辨率只有4.5?。脫水并不能使BamD或者BamCD復(fù)合物分辨率有所提高。硒代甲硫氨酸取代結(jié)合MAD來(lái)進(jìn)行BamCD復(fù)合物的相位解