抗膽堿酯酶劑亞致死劑量對棉鈴蟲Helicoverpa armigera（Hubner）乙酰膽堿酯酶誘導(dǎo)作用的研究.pdf

1、該文以棉鈴蟲Helicoverpa armigera(Hubner)敏感品系(SS-H)為對象,系統(tǒng)研究了抗膽堿脂酶劑亞致死劑量對乙酰膽堿酯酶(AChE)的誘導(dǎo)作用,并對棉鈴蟲AChE進(jìn)行了部分純化,初步研究了棉鈴蟲對殺蟲藥劑耐性的分子機(jī)制.具體結(jié)果如下:1.選用3種抗膽堿酯酶劑亞致死劑量(LD<,10>)處理棉鈴蟲3齡幼蟲24h后,測定存活幼蟲對辛硫磷、馬拉硫磷、滅多威、溴氰菊酯和高效氯氰菊酯5種殺蟲藥劑敏感度的變化.結(jié)果顯示不同抗膽

2、堿酯酶的誘導(dǎo)作用不同,導(dǎo)致棉鈴蟲對不同殺蟲藥劑敏感度的變化存在差異.2.辛硫磷亞致死劑量(LD<,10>)誘導(dǎo)棉鈴蟲144h內(nèi),AChE活性下降,對底物(ATCh)的親和力在其誘導(dǎo)的48h內(nèi)無明顯變化.馬拉硫磷和滅多威LD<,10>劑量誘導(dǎo)對棉鈴蟲AChE活性誘導(dǎo)增加效應(yīng)較為明顯,但48h內(nèi)對底物的親和力卻明顯降低.在對照組K<,m>值明顯升高的72~120h內(nèi),3個(gè)處理組K<,m>值同本組其他時(shí)間段K<,m>值相比無明顯變化.3.辛硫

3、磷不同劑量對棉鈴蟲幼蟲AChE比活力存在一定的抑制作用;馬拉硫磷和滅多威對AChE的誘導(dǎo)則是隨著劑量的增加,存在先抑制后誘導(dǎo)增加的作用.相同劑量下,滅多威的誘導(dǎo)增加效應(yīng)較馬拉硫磷明顯.4.辛硫磷LD<,10>劑量連續(xù)誘導(dǎo)棉鈴蟲4代,對AChE比活力和V<,max>作用表現(xiàn)為先抑制后誘導(dǎo)增加,但變化幅度較小.馬拉硫磷和滅多威LD<,10>劑量誘導(dǎo)棉鈴蟲幼蟲兩代后,對乙酰膽堿酯酶的誘導(dǎo)作用不明顯.長期誘導(dǎo)過程中,三種藥劑LD<,10>劑量均

4、明顯影響昆蟲生長發(fā)育.5.比較研究了棉鈴蟲兩個(gè)敏感品系(SS-N和SS-H)和一個(gè)抗性種群(山東陽谷,RR-Y)對3種抗膽堿酯酶劑的耐藥性,同SS-N品系相比,RR-Y對辛硫磷、馬拉硫磷和滅多威的抗性分別為7,13和20倍.同SS-H品系相比,SS-N品系對三種藥劑更敏感.動力學(xué)研究表明棉鈴蟲3個(gè)品系A(chǔ)ChE的比活力和V<,max>沒有顯著差異,而AChE對底物ATCh的親和力(K<,m>)RR-Y卻顯著低于敏感品系.采用RT-PCR技

5、術(shù)從棉鈴蟲成蟲頭部克隆了AChE基因片段并制備探針進(jìn)行Southern雜交,證明在有機(jī)磷和氨基甲酸酯抗性棉鈴蟲中不存在乙酰膽堿酯酶基因的擴(kuò)增.對抗膽堿酯酶劑亞致死劑量各處理組AChE Southern雜交表明,在亞致死劑量處理后,對AChE活性的誘導(dǎo)作用不是由于乙酰膽堿酯酶基因的擴(kuò)增.6.抗膽堿酯酶劑亞致死劑量處理24h后,對棉鈴蟲AChE的密度梯度心結(jié)果顯示,處理前后AChE活性分布的變化在各梯度層差異顯著,可能是由于抗膽堿酯酶劑亞致

6、死劑量處理使棉鈴蟲AChE分子型的亞基結(jié)合發(fā)生改變造成的.棉鈴蟲對照及處理組AChE不同分子型敏感度的研究表明,對毒扁豆堿及滅多威抑制均相對敏感的5.3S AChE和只對毒扁豆堿的抑制相對敏感的8.7S AChE,處理后其I<,50>值與對照相比明顯升高,預(yù)示抗膽堿酯酶劑亞致死劑量引起的AChE活性和對底物親和力的改變,可能是某些分子型分布比例及其對抑制劑敏感的AChE分子型敏感度發(fā)生改變的綜合效應(yīng).7.采用CEA親和層析法對棉鈴蟲AC