DNA-PKcs-Gadd45β及GAP-43-Nogo-A在不同運動強度預處理腦缺血大鼠海馬區(qū)的表達及意義.pdf

1、目的：比較不同運動強度預處理下腦缺血大鼠海馬區(qū)DNA-PKcs/GADD45β及Nogo-A/GAP-43的表達變化，并探討其意義。
　　方法：80只健康雄性 SD大鼠隨機分為：假手術組（n=20）、腦缺血組（n=20）、運動強度Ⅰ預處理組（n=20），運動強度Ⅱ預處理組（n=20）。手術前4周開始對運動預處理組實驗大鼠進行跑臺運動訓練，運動強度Ⅰ預處理組設置為16m/min*30min；運動強度Ⅱ預處理組采取強度遞增的方式進行跑

2、臺訓練，設置開始的速度為10m/min，逐漸提高速度并在3min內(nèi)達到預定速度（19.3m/min），保持速度直至力竭。用改良的Pulsinelli四血管阻斷法制備SD大鼠全腦缺血模型，分別于腦缺血后6h、1d、3d、7d五個時間點處死大鼠。通過光鏡觀察HE染色后腦組織形態(tài)變化；分別用黃嘌呤氧化酶法和TBA法檢測大鼠腦組織SOD活性、MDA含量；通過免疫組化和PCR法觀察各時間點DNA-PKcs、GADD45β以及Nogo-A、GAP-

3、43在海馬區(qū)的蛋白及mRNA表達情況。
　　結(jié)果：1、形態(tài)觀察結(jié)果：與假手術組比較，腦缺血組在6h、1d、3d、7d時間點神經(jīng)元排列不規(guī)整，胞漿增多，核仁消失，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；與腦缺血組比較，運動強度Ⅰ預處理組在6h、1d、3d、7d時間點神經(jīng)元細胞壞死率降低，神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞出現(xiàn)核深染、固縮變性的情況有所減輕（P＜0.01）；而運動強度Ⅱ預處理組在6h、1d、3d、7d時間點較腦缺血組神經(jīng)元壞死率進一步升高，可

4、見較多腫脹的神經(jīng)元，神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞出現(xiàn)核固縮、深染的情況進一步加重（P＜0.01）。腦缺血各組神經(jīng)元細胞壞死率隨時間點呈遞增趨勢，于7d時最為嚴重（P＜0.01）。2、SOD活性測定結(jié)果：與假手術組比較，腦缺血組在6h、1d、3d、7d時間點SOD活性明顯降低（P＜0.01）。與腦缺血組比較，運動強度Ⅰ預處理組在6h、1d、3d、7d時間點SOD活性明顯升高（P＜0.01）；而運動強度Ⅱ預處理組在6h、1d、3d、7d時間點SOD活性

5、明顯降低（P＜0.01）。3、MDA含量測定結(jié)果：與假手術組比較，腦缺血組在6h、1d、3d、7d時間點MDA含量明顯升高（P＜0.01）。與腦缺血組比較，運動強度Ⅰ預處理組在6h、1d、3d、7d時間點MDA含量明顯降低（P＜0.01）；而運動強度Ⅱ預處理組在6h、1d、3d、7d時間點MDA含量明顯升高（P＜0.01）。4、DNA-PKcs、GADD45β免疫組化與RT-PCR分析結(jié)果：免疫組化：DNA-PKcs、GADD45β在假

6、手術組中有胞漿弱表達，而在腦缺血各組各時間點的細胞核中有強陽性表達，染色呈棕黃色。與假手術組比較，腦缺血組在6h、1d、3d、7d時間點DNA-PKcs、GADD45β的表達水平明顯增加(P＜0.01)。與腦缺血組比較，運動強度Ⅰ預處理組DNA-PKcs、GADD45β在6h、1d、3d、7d時間點呈較高水平表達（P＜0.01）；而運動強度Ⅱ預處理組DNA-PKcs、GADD45β的表達水平顯著降低，且下降幅度大（P＜0.01）。RT-

7、PCR：與假手術組比較，腦缺血組在6h、1d、3d、7d時間點 DNA-PKcs、GADD45βmRNA的表達水平明顯增加(P＜0.01)。與腦缺血組比較，運動強度Ⅰ預處理組DNA-PKcs、GADD45βmRNA在6h、1d、3d、7d時間點呈較高水平表達（P＜0.01）；而運動強度Ⅱ預處理組DNA-PKcs、GADD45βmRNA的表達水平顯著降低（P＜0.01）。5 Nogo-A、GAP-43免疫組化與RT-PCR分析結(jié)果：免疫組

8、化：Nogo-A、GAP-43在假手術組中有胞漿弱表達，而在腦缺血各組各時間點的細胞核中有強陽性表達，染色呈棕黃色。與假手術組比較，腦缺血組在6h、1d、3d、7d時間點Nogo-A、GAP-43的表達明顯增加（P＜0.01)。與腦缺血組比較，運動強度Ⅰ預處理組在6h、1d、3d、7d時間點GAP-43呈較高水平表達，Nogo-A表達減少（P＜0.01）；而運動強度Ⅱ預處理組GAP-43表達水平顯著降低，Nogo-A表達持續(xù)增高（P＜0

9、.01）。RT-PCR：與假手術組比較，腦缺血組在6h、1d、3d、7d時間點 GAP-43mRNA的表達明顯增加，Nogo-A mRNA表達減少(P＜0.01)。與腦缺血組比較，運動強度Ⅰ預處理組在6h、1d、3d、7d時間點GAP-43mRNA呈較高水平表達，Nogo-A mRNA表達降低（P＜0.01）；而運動強度Ⅱ預處理組GAP-43mRNA表達水平顯著降低，Nogo-A mRNA表達持續(xù)增高（P＜0.01）。
　　結(jié)論：