ICOS與PD-1正負性共刺激分子在重癥肌無力患者外周血中的表達及免疫學(xué)意義.pdf

1、第一部分、重癥肌無力患者外周血細胞上ICOS和PD-1共表達及意義
　　目的：研究重癥肌無力(myasthenia gravis,MG)患者外周血單個核細胞上ICOS、ICOSL的表達特性及PD-1、ICOS在CD4+T淋巴細胞上的共表達，探討正、負性共刺激信號失衡在重癥肌無力病理過程中的作用。
　　方法：應(yīng)用免疫熒光標記的流式細胞術(shù)檢測69例MG患者和55例健康對照者(healthy control,HC)外周血CD4+T

2、細胞表面ICOS，單核細胞和B淋巴細胞表面ICOSL的表達。同時分別檢測ICOS、PD-1在CD4+和CD8+T細胞亞群的共表達。
　　結(jié)果：
　?、偻庵苎狢D4+T淋巴細胞上ICOS的表達，MG組(54.43±35.34)％顯著高于HC組(15.61±10.20)%，P<0.001。MG胸腺瘤組CD4+細胞亞群上ICOS陽性表達百分比為(70.81±21.98)%較MG胸腺正常組的(49.99±7.90)%明顯升高(P=0

3、.018)。MG組CD4+T細胞ICOS表達陽性百分比在不同性別、發(fā)病年齡、臨床分型組間比較無顯著差異。
　?、贑D14+單核細胞上的ICOSL陽性表達百分比，MG組(45.33±22.97)%較HC組(37.59±18.11)%明顯升高，P<0.05，CD19+B淋巴細胞上ICOSL的表達，MG組(40.26±25.14)%較HC組(30.01±18.81)%，明顯升高(P=0.014)。MG組CD14+單核細胞和CD19+B淋

4、巴細胞上ICOSL表達陽性百分比在不同性別、發(fā)病年齡、臨床分型、胸腺情況分組間比較無顯著差異。
　?、跜D4+T細胞上的PD-1+ICOS+亞群百分比，MG組為(10.60±9.25)%較HC組(2.69±1.86)%明顯升高(P<0.0001)；MG胸腺瘤組為(16.09±11.05)%較MG胸腺正常組(9.31±8.57)%升高，P<0.05。MG組CD4+T細胞上的PD-1+ICOS+亞群百分比在性別、發(fā)病年齡、臨床分型分組

5、間比較無顯著性差異。CD8+T細胞上的PD-1+ICOS+亞群陽性百分比，MG組為(7.67±7.43)%較HC組(3.25±3.12)%明顯升高(P<0.001)。
　　結(jié)論：MG患者外周血中CD4+T細胞上的ICOS+亞群、CD19+B淋巴細胞和CD14+單核細胞上的ICOSL+亞群表達較HC組均顯著升高，提示ICOS/ICOSL正性信號通路發(fā)揮了調(diào)節(jié)作用。MG患者外周血中PD-1、ICOS在CD4+T細胞上共表達較對照組顯著

6、升高，提示CD4+T細胞上的PD-1+ICOS+亞群參與了MG免疫病理過程。
　　第二部分、重癥肌無力患者外周血中膜型和可溶性PD-1、PD-L1的表達及意義
　　目的：研究重癥肌無力患者外周血中膜型和可溶性PD-1、PD-L1的表達特性，探討PD-1/PD-L1途徑在MG免疫病理中的作用機制。
　　方法：應(yīng)用免疫熒光標記、流式細胞術(shù)檢測69例MG患者和55例健康對照者外周血T細胞亞群上膜型PD-1和單核細胞亞群上膜型

7、PD-L1的表達。按照性別、年齡、臨床分型和胸腺是否正常進行分組配對，選取29例MG患者和25例健康對照者的血清用ELISA法檢測可溶性PD-1和PD-L1的表達。
　　結(jié)果：
　?、費G組CD4+T細胞上PD-1表達陽性百分比為(17.02±1.26)%較HC組的(10.62±0.92)%明顯升高(P<0.001)。MG胸腺異常組CD4+T細胞上的PD-1陽性百分比為(22.48±2.43)%較MG胸腺正常組(16.2±1

8、.34)%明顯升高(P<0.05)。MG組CD4+T淋巴細胞上的PD-1陽性百分比在性別、發(fā)病年齡、臨床分型各組間比較無顯著性差異。
　?、贛G組CD14+單核細胞PD-L1陽性表達為(44.51±3.81)%較HC組(12.46±1.17)%明顯升高(P<0.0001)，在性別、發(fā)病年齡、臨床分型、胸腺情況分組之間比較無顯著差異
　?、跰G患者血清中可溶性PD-1(sPD-1)表達(1.87±0.64)ng/ml較HC組(

9、1.49±0.70)ng/ml明顯升高(P=0.043)，早發(fā)型患者sPD-1濃度為(2.24±0.49)ng/ml明顯高于晚發(fā)型患者(1.7±0.63)ng/ml，(P=0.032)，sPD-1分泌水平與患者年齡呈負相關(guān)(r=-0.484,P=0.008)。MG患者血清中sPD-1表達在性別、臨床分型、胸腺情況各組間比較無顯著性差異。
　?、躆G組可溶性PD-L1(sPD-L1)濃度為(0.20±0.16)ng/ml較HC組的(

10、0.16±0.05)ng/ml無明顯差異(P>0.05)。MG組sPD-L1表達在性別、發(fā)病年齡、臨床分型、胸腺情況各分組間比較無顯著性差異。
　　結(jié)論：MG患者CD4+T細胞上的PD-1+亞群和CD14+單核細胞上的PD-L1+亞群表達增加提示PD-1/PD-L1參與了MG的免疫病理，且PD-1/PD-L1信號途徑存在功能障礙，推測是高分泌的sPD-1相對過剩，干擾PD-1/PD-L1信號途徑有關(guān)。發(fā)現(xiàn)PD-1/ICOS共表達的

11、CD4+T細胞上，sPD-1的相對過量表達，可能引起PD-1/PD-L1負性信號轉(zhuǎn)導(dǎo)障礙而ICOS/ICOSL正性信號過強，是導(dǎo)致該類細胞過度活化，MG疾病進展的機制之一。
　　第三部分、重癥肌無力患者血清中細胞因子IL-4、IL-17A、IFN-γ分泌水平及意義
　　目的：研究T細胞各亞群的細胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17A在MG患者中的分泌情況，探討其與MG患者正負性共刺激分子ICOS/PD-1表達失衡的相關(guān)性。

12、
　　方法：選取MG患者29例和25例健康對照者用ELISA法檢測血清中IL-4、IL-17A、IFN-γ、抗AchR-Ab的濃度。
　　結(jié)果：
　　①MG患者血清中IL-4表達(6.252±2.455)pg/ml高于HC組(5.409±1.231)pg/ml，P=0.04；早發(fā)型 MG患者 IL-4分泌為(7.643±3.142)pg/ml明顯高于晚發(fā)型患者(5.335±1.424)pg/ml，P=0.015，且MG

13、患者血清中IL-4的濃度與患者年齡呈負相關(guān)(r=-0.403，P=0.009)。MG組IL-4表達在性別、臨床分型、胸腺情況各分組間比較無顯著性差異。
　?、?MG患者血清中 IL-17A(50.763±13.102)pg/ml與HC組(63.482±30.641)pg/ml比較分泌減少(P=0.01)。MG組IL-17A表達在性別、發(fā)病年齡、臨床分型、胸腺情況各分組間比較無顯著性差異。
　?、跰G患者血清中IFN-γ表達(

14、17.121±3.171)pg/ml與HC組(19.094±8.00)pg/ml無顯著差異(P=0.117)。MG組IFN-γ表達在性別、發(fā)病年齡、臨床分型、胸腺情況各分組間比較無顯著性差異。
　?、躆G患者血清中抗Ach-Ab陽性占64%，全身型患者抗體陽性率為80%，眼肌型為53%，MG合并胸腺瘤患者抗體陽性率為92%。抗AchR-Ab陽性MG患者血清中抗體濃度與sPD-1、IL-4、IL-17A、IFN-γ無顯著的相關(guān)性。<