波爾山羊亞種間體細胞克隆——核與胞質相容性對克隆胚胎發(fā)育影響的研究.pdf

1、同濟大學生命科學與技術學院博士學位論文波爾山羊亞種間體細胞克隆——核與胞質相容性對克隆胚胎發(fā)育影響的研究姓名：陳建泉申請學位級別：博士專業(yè)：基因工程與蛋白質工程指導教師：成國祥20070301摘要生存活克隆羊的效率顯著低于試驗組I I ( 4 ．5 5 ％V S ．．9 ．0 9 ％，p < O ．0 5 ) 。上述結果表明供核細胞的兩次饑餓是一種較好的供核細胞處理方法，并己成為本實驗室供核細胞處理的常規(guī)方法。二、波爾J l I

2、羊弧種間體細胞克隆的研究。基于波爾山羊和薩能奶I | I 羊這兩種弧種間S C N T 尚未獲得克隆后代，對此，我們作了兩個層次的] 二作。第一，把彳i 同年齡波爾l I I 羊的成纖維細胞移植到去核的薩能奶l _ I I 羊M I I 期卵母細胞，探索Ⅱ種間克隆效率是否和供核波爾羊的年齡有關。結果表明，采用3 歲和9 歲波爾羊成纖維細胞構建的弧種間S C N T 胚胎早期妊娠雖可分別達到4 5 ．6 ％和2 8 ．6 ％，但均無克隆后

3、代出生，唯有2 月齡波爾I J I 羊成纖維細胞構建的亞種間S C N T 胚胎，早期妊娠率達到5 0 ％，但最終僅l 頭克隆后代存活。這一結果證實，距種間的核移植是可以獲得克隆后代，但著床后克隆胎兒喪失率極高，克隆效率很低( 僅2 ．8 ％) ，克隆效率受供核羊的年齡影響。第二，把2 月齡波爾I J J 羊的成纖維細胞移入雜交F l 代羊( 薩能奶I I J 羊早×波爾羊古) 的去核M I I 期卵母細胞，并以薩能奶E l

4、I 羊的同種核移植作對照( 即奶I I I 羊成纖維細胞移入奶t 1 ．I 羊去核的M I I 期卵母細胞) 。結果顯示，盡管波爾山羊成纖維核移入雜交F 1 代羊的去核卵母細胞的重構胚克隆效率為5 ．5 ％，較之同種克隆效率( 1 1 ．4 3 ％) 要低，但較上述第一個層次的亞種間克隆效率( 2 ．8 ％) 高出1 倍。該結果揭示了核質之間的親緣關系的相容性對克隆胚胎的著床后發(fā)育潛力具有重大影響。三、核質親緣相容互補性對亞種間體細胞克

5、隆胚胎著床后發(fā)育率的影響。本試驗是在上述實驗結果的基礎上進一步驗證不同親緣水平的核與胞質的相容性對亞種間S C N T 胚胎發(fā)育率的影響。本研究構建了6 種核質問4 ；同相容性的S C N T 胚胎來比較核質相容互補性對克隆效率的影響。其中，以波爾羊成纖維細胞作供核細胞，以去核的薩能奶I J f 羊( 見二) 、雜交F l 代羊( 薩能奶l I I 羊早×波爾I l I 羊杏，見二) 以及波爾| I j 羊等的卵分別作為核的受

6、體細胞，構建了3 種S C N T 胚胎：又以薩能奶I l —I 羊卵作為核的受體細胞，以薩能奶1 I —I 羊、雜交F 1 代羊( 薩能奶L l I 羊早×波爾J 1 ．1 羊6 ) 、雜交F 2 代羊( 雜交F 1 羊早×波爾I I I 羊6 ) 的成纖維細胞分別作為供核細胞，構建了3 種S C N T 胚胎。結果顯示，這些S C N T胚胎的著床前發(fā)育率沒有明顯的差異；然而，核與胞質相容性彳i 同的S C N