修飾多發(fā)性硬化病程藥物機(jī)制探索——醋酸格拉默.pdf

1、研究目的：
　　醋酸格拉默（Glatiramer acetate,GA）是一種具有免疫調(diào)節(jié)作用的藥物，它已經(jīng)被批準(zhǔn)用于多發(fā)性硬化癥（中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾?。┑囊痪€治療。但是，醋酸格拉默在治療多發(fā)性硬化癥中的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制仍不完全清楚。雖然改善對髓鞘抗原,如中樞髓鞘堿性蛋白（Myelin basic protein,MBP）的免疫反應(yīng)可能是它的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制，但是醋酸格拉默的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制是否是抗原非特異性的仍不清楚。在本實(shí)驗(yàn)中，我們應(yīng)用

2、與中樞抗原MBP不同的周圍神經(jīng)抗原P0，誘導(dǎo)人類吉蘭巴雷綜合征的動物模型-實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎（Experimental autoimmune neuritis,EAN）作為工具，探索醋酸格拉默的免疫調(diào)節(jié)作用是否具有抗原非特異性。
　　研究內(nèi)容和方法：
　　通過周圍神經(jīng)髓鞘抗原P0（Protein0）免疫lewis大鼠的方法誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎，在lewis鼠造模前和發(fā)病后分別皮下注射醋酸格拉默，觀察動物的臨床評分和

3、體重變化。同時在發(fā)病高峰期即造模后第16天，通過肌電圖評估坐骨神經(jīng)髓鞘和軸索損傷；通過HE染色和Luxol Fast Blue病理染色觀察髓鞘變化；通過酶聯(lián)免疫法檢測多種炎性細(xì)胞因子變化。體外實(shí)驗(yàn)通過H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)滲入法檢測醋酸格拉默對不同抗原P0、MBP、LPS（Lipopolysaccharide）刺激的T細(xì)胞增殖。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　免疫前或者免疫后10天皮下注射醋酸格拉默均減輕了該疾病的臨床評分，

4、同時醋酸格拉默治療組大鼠的體重明顯較對照組增加，具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。肌電圖研究表明，治療組坐骨神經(jīng)遠(yuǎn)端運(yùn)動潛伏期明顯降低，運(yùn)動傳導(dǎo)速度明顯增加，波幅明顯增高，表明醋酸格拉默減輕了髓鞘和軸索損傷。神經(jīng)病理HE和Luxol Fast Blue染色證實(shí)了免疫前注射醋酸格拉默減輕了P0誘導(dǎo)的EAN坐骨神經(jīng)脫髓鞘。ELISA（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay）結(jié)果表明在治療組，炎性因子如Interferon-g

5、ama（INF-γ），IL-6，IL-12，IL-17明顯降低，IL-10明顯升高，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，進(jìn)一步驗(yàn)證了醋酸格拉默對周圍神經(jīng)脫髓鞘疾病具有抑制炎癥的作用。我們的體外實(shí)驗(yàn)通過 H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)滲入法進(jìn)一步證實(shí)了醋酸格拉默對周圍神經(jīng)抗原P0、中樞神經(jīng)抗原MBP、非特異性抗原刺激的T細(xì)胞增殖均有抑制作用，治療組和對照組有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　醋酸格拉默減輕了實(shí)驗(yàn)性自身免疫性神經(jīng)炎造成的神經(jīng)功