mRNA差異顯示技術(shù)研究糙皮側(cè)耳菌絲體及子實(shí)體差異表達(dá)基因.pdf

1、糙皮側(cè)耳(Pleurotus ostreatus),俗稱(chēng)平菇,英文名為oyster mushroom,分類(lèi)上屬于擔(dān)子菌門(mén)(Basidiomycota),層菌綱(Hymenomycetes),傘菌目(Agaricales),側(cè)耳科(Pieurotaceae),側(cè)耳屬(Pleurotus)。本研究采用mRNA差異顯示技術(shù)分離平菇生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中菌絲體和子實(shí)體的差異表達(dá)基因。以糙皮側(cè)耳739生長(zhǎng)發(fā)育的四個(gè)階段菌絲體、原基、菇蕾和成熟子實(shí)體的總R

2、NA為模板,用T12M(M分別為G、A、C)3種錨定引物和14種隨機(jī)引物組合進(jìn)行DDRT-PCR,經(jīng)8％變性PAGE凝膠電泳和硝酸銀染色,共得到130個(gè)差異條帶,片段長(zhǎng)度為300—1500bp左右,對(duì)其中17個(gè)差異片段進(jìn)行克隆測(cè)序,測(cè)序結(jié)果通過(guò)GenBank進(jìn)行BLAST檢索分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Seq1,Seq2及Seq3與已知基因有較高的同源性,而其他片段與已知基因的同源性較低。其中,Seq1為421bp,為糙皮側(cè)耳的一個(gè)未知基因,它在菌絲

3、體中表達(dá)不顯著,但在原基、菇蕾以及子實(shí)體中表達(dá)較強(qiáng)烈,在灰蓋鬼傘以及香菇中也有類(lèi)似發(fā)現(xiàn)。Seq2為607bp,其在菌絲體中的表達(dá)要明顯強(qiáng)于原基、菇蕾和成熟子實(shí)體,它與蘋(píng)果酸脫氫酶(MDH)有很高的同源性,MDH是糖酵解途徑和三羧酸循環(huán)中非常重要的酶,它可能涉及菌絲體發(fā)育成原基過(guò)程中的某些活躍的生理生化活動(dòng),如能量代謝等。Seq3為293bp,與灰蓋鬼傘中的一個(gè)未知蛋白有很高的同源性,同時(shí),它與棒曲霉中的肽基脯氨酰異構(gòu)酶(PPIase)有