重組人晶狀體蛋白αA-crystallin對CpUDG酶活性的保護作用的研究.pdf

1、分子伴侶可以定義為一類在序列上沒有相關(guān)性但有共同功能的蛋白質(zhì),它們在細胞內(nèi)幫助其它多肽的結(jié)構(gòu)完成正確組裝,而且在組裝完畢后與之分離,不構(gòu)成這些蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)執(zhí)行功能時的組分。它在人體內(nèi)廣泛存在，不單對蛋白質(zhì)的折疊和組裝起到重要作用，還可以協(xié)助線粒體蛋白跨膜轉(zhuǎn)運，調(diào)節(jié)復(fù)制、轉(zhuǎn)錄過程和各種信息傳遞通路，以及幫助微管的形成與修復(fù)。 Α晶狀體蛋白是脊椎動物眼晶狀體中的主要的蛋白成分，是小分子熱休克蛋白(small heat shock pr

2、oteins ,sHSPs) 的成員之一，屬于分子伴侶家族。Α晶狀體蛋白的分子伴侶功能對保持晶狀體保持良好的通透性和正常的屈光功能以及預(yù)防晶狀體白內(nèi)障的形成有著重要作用。Α晶狀體蛋白有兩個亞基αA和αB，它們同樣具有分子伴侶功能。 在以往的報道中，αA晶狀體蛋白的分子伴侶功能主要集中表現(xiàn)在幫助蛋白質(zhì)復(fù)性，防止蛋白質(zhì)受化學(xué)物質(zhì)、熱、紫外線等的作用而凝集等方面。通過Gateway克隆系統(tǒng)將αA編碼基因克隆到表達載體中并在大腸桿菌中表

3、達純化，得到重組αA晶狀體蛋白。經(jīng)過實驗驗證，αA晶狀體蛋白不但可以防止蛋白質(zhì)在應(yīng)激條件下發(fā)生凝集，更可以在高溫的情況下保護CpUDG的酶活性。當反應(yīng)溫度為45℃或者更高的時候，αA晶狀體蛋白可以很好的保護CpUDG的酶活性免受熱激失活。而且隨著αA晶狀體蛋白濃度的增加，這種保護作用越來越明顯。αA晶狀體蛋白還可以提高CpUDG的熱穩(wěn)定性。熱激時αA晶狀體蛋白可以很好的保護CpUDG的活性。這項發(fā)現(xiàn)進一步揭示αA晶狀體蛋白的新功能，同時