小鼠晶狀體干細胞的初步研究.pdf

1、背景:
　　干細胞是一類具有自我更新和多向分化能力的細胞,可以重建具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能的組織或器官。在多種組織和器官內(nèi)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)存在相應(yīng)的干細胞,如造血干細胞,骨髓干細胞等。在眼部組織中也發(fā)現(xiàn)多種干細胞,如角膜緣干細胞,視網(wǎng)膜干細胞等。已有的研究顯示在晶狀體內(nèi)可能存在干細胞,但對其在晶狀體上的分布位置和特性的研究尚無明確的結(jié)論。本研究依據(jù)干細胞具有代謝緩慢和表達特異標記物的特點,標記有干細胞特性的細胞,確定其在晶狀體中的位置,根據(jù)

2、損傷刺激干細胞增殖的特性,觀察在晶狀體前囊膜損傷后晶狀體上皮細胞的增殖變化情況,進一步明確晶狀體中干細胞的存在及分布規(guī)律。
　　目的:
　　明確小鼠晶狀體上皮細胞中慢周期細胞和有干細胞標志蛋白細胞的分布特點,觀察在損傷刺激下晶狀體上皮細胞的增殖變化規(guī)律。
　　方法:
　　60只3周齡Balb/c小鼠按隨機數(shù)字表法隨機分為BrdU標記組30只(30只眼)和生理鹽水對照組30只(30只眼)。BrdU標記組按150mg

3、/kg體重的劑量每天兩次腹腔注射BrdU,連續(xù)注射10d,在BrdU標記完成后的第0、1、2、3、4、6、8、10、12和14周取小鼠晶狀體,制備冰凍切片,用免疫熒光染色法進行BrdU和胚胎干細胞標志蛋白SOX2的免疫熒光染色,在熒光顯微鏡下觀察BrdU標記細胞的量和分布變化,SOX2陽性細胞在晶狀體上皮細胞中的表達和分布規(guī)律以及與BrdU標記細胞的關(guān)系。對照組按15ml/kg體重注射生理鹽水,做平行對照處理。
　　另取3周齡Ba

4、lb/c小鼠(12只)分為4組,構(gòu)建晶狀體前囊膜損傷模型。右眼做損傷模型為實驗眼,左眼不做處理為對照眼。各組小鼠(n=3)分別在損傷后0h、12h、24h和36h,按150mg/kg體重一次腹腔注射BrdU,在注射后1h摘取眼球,取出晶狀體并制備晶狀體囊膜鋪片,用免疫熒光法進行BrdU免疫熒光染色,在熒光顯微鏡下觀察和計數(shù)中央?yún)^(qū)和赤道區(qū)BrdU陽性細胞的數(shù)量。
　　結(jié)果:
　　在完成BrdU標記后(即0周),BrdU標記組晶

5、狀體上皮中央?yún)^(qū)和赤道區(qū)細胞BrdU標記率均達100％。隨著小鼠的周齡增加,晶狀體上皮細胞的BrdU標記率逐漸下降,觀察到12周時,BrdU標記率降至最低,在中央?yún)^(qū)和赤道區(qū)分別為14.23%和5.86%(t=-20.123,P=0.000)。SOX2在晶狀體上皮細胞內(nèi)表達穩(wěn)定,陽性細胞主要分布于晶狀體上皮的中央?yún)^(qū),0周和14周時中央?yún)^(qū)上皮SOX2陽性細胞率分別為3.74%和3.70%(t=0.027,P=0.979)。在BrdU標記滯留細

6、胞中有一部分細胞同時表達SOX2,分布在晶狀體上皮的中央?yún)^(qū)。
　　在前囊膜未損傷組晶狀體上皮中央?yún)^(qū)BrdU陽性細胞數(shù)目在各時間點較為穩(wěn)定,前囊膜損傷組晶狀體上皮中央?yún)^(qū)BrdU陽性細胞數(shù)目每個高倍視野在0h為44.9±10.9(vs.28.5±8.0),12h達到高峰為111.8±17.2(vs.26.4±6.0),到36h組降至27.5±9.7(vs.26.1±8.1)。兩組赤道區(qū)BrdU陽性細胞數(shù)目穩(wěn)定,兩組各時間點之間均無顯著