長鏈非編碼RNAs調(diào)控骨橋蛋白在草酸鈉結(jié)晶腎損傷的機(jī)制研究.pdf

1、[目的]:
　　運(yùn)用生物信息學(xué)方法檢測與骨橋蛋白相關(guān)的LncRNAs在草酸鈉誘導(dǎo)結(jié)晶腎損傷中的差異變化，初步探討骨橋蛋白相關(guān)LncRNAs在結(jié)晶腎損傷中的作用機(jī)制。
　　[方法]:
　　利用草酸鈉刺激腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)構(gòu)建結(jié)晶腎損傷模型。采用實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)技術(shù)，在通過草酸鈉刺激腎小管上皮細(xì)胞(HK-2)構(gòu)建的細(xì)胞模型中驗(yàn)證骨橋蛋白表達(dá)水平。運(yùn)用RNA干擾技術(shù)構(gòu)建骨橋蛋白敲低細(xì)胞模型。選用Arra

2、ystar公司提供的人類全基因組lncRNA芯片(V4.0)對3組骨橋蛋白干擾組和3組對照組腎小管上皮細(xì)胞結(jié)晶模型進(jìn)行骨橋蛋白(OPN)相關(guān)lncRNAs以及mRNAs差異基因表達(dá)水平檢測。其中l(wèi)ncRNAs來源于權(quán)威公共轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫（包括Refseq、UCSC knowngenes、Gencode等）。差異基因篩選條件是差異倍數(shù)＞1.5，P＜0.05。對差異基因進(jìn)行基因本體論(GO)及信號通路分析(KEGG Pathway)等生物信息

3、學(xué)分析。
　　[結(jié)果]:
　　1.通過草酸鈉刺激腎小管上皮細(xì)胞成功構(gòu)建結(jié)晶腎損傷細(xì)胞模型以及通過RNA干擾技術(shù)構(gòu)建骨橋蛋白干擾模型。
　　2.全基因組lncRNA芯片提示在腎小管上皮細(xì)胞結(jié)晶腎損傷模型中存在骨橋蛋白相關(guān)差異表達(dá)的lncRNAs，共有583個lncRNAs存在差異表達(dá)，其中骨橋蛋白干擾組表達(dá)上調(diào)354個，下調(diào)229個;共有235個mRNAs存在差異表達(dá)，其中干擾組上調(diào)139個，下調(diào)96個。
　　3.

4、通過基因本體論(GO)及信號通路分析(KEGG Pathway)等生物信息學(xué)分析表明，差異表達(dá)的lncRNAs與細(xì)胞生長、酶活性調(diào)節(jié)、PI3k/Akt/NF-κB信號通路、Wnt信號通路等相關(guān)聯(lián)。KEGG信號通路分析結(jié)果提示，上調(diào)lncRNAs與14條通路相關(guān)，而下調(diào)lncRNAs與5條通路相關(guān)。綜合分析提示NOD樣受體信號通路、PI3k/Akt/NF-κB信號通路、Wnt信號通路等炎癥相關(guān)通路顯著富集。
　　[結(jié)論]: