Hog1p基因?qū)π律[球菌不同變種毒力影響的初步研究.pdf

1、新生隱球菌是一種在全球范圍分布的致病真菌病原體。大部分病例報道感染菌株主要以新生隱球菌新生變種為主，新生隱球菌格特變種（又叫格特隱球菌）次之，但近年來格特隱球菌致病報道有逐漸增多的趨勢。作為一種重要的病原真菌，新生隱球菌多感染免疫功能低下的患者。在我國，隱球菌病還是以非AIDS人群為主，但伴發(fā)于AIDS的病例報道也在逐年增多。
　　 目前研究比較多的新生隱球菌的致病因子包括37℃生長、黑素、莢膜、胞外蛋白酶等，然而我們對新生隱球

2、菌的具體致病機(jī)制的了解仍然有限。新生隱球菌要侵入宿主并在宿主中生存和繁殖必須要適應(yīng)宿主環(huán)境的高滲壓力。在所有致病真菌中，MAPK通路的致病機(jī)制已經(jīng)在白念珠菌中得到最詳細(xì)的描述，可能是由于其介導(dǎo)白念珠菌感染中關(guān)鍵的形態(tài)學(xué)變化:酵母相向菌絲相的轉(zhuǎn)換。近來，越來越多的證據(jù)表明，新生隱球菌的MAPK通路與釀酒酵母菌和白念珠菌的MAPK通路相似，但同時具備自身的特點(diǎn)。因此我們推測MAPK通路中的hog1蛋白也可能在新生隱球菌的感染致病中扮演了重要

3、角色。目前幾乎所用HOG-MAPK通路的研究都集中于新生隱球菌血清A型菌株，而本實(shí)驗(yàn)我們將主要通過對hog1p的敲除與回復(fù)，探索其在格特隱球菌中毒力調(diào)控中的作用，并嘗試找出該基因在新生隱球菌血清A型和B型菌株毒力調(diào)控中的差異。
　　 實(shí)驗(yàn)中，我們分別敲除新生隱球菌比利時標(biāo)準(zhǔn)株（BLS71，血清A型）和臨床分離株(CZ2012，血清B型)的hog1p基因構(gòu)建缺陷株，再將hog1p基因重新整合到缺陷株中獲得重建株。然后比較原始株、缺

4、陷株和重建株三種不同菌株對體外毒力因子如壓力應(yīng)激敏感性、莢膜和黑素生成、尿素酶活性及抗真菌藥物敏感性的差異;選用健康C57BL/6雌性小鼠，在正常免疫情況下和腹腔注射環(huán)磷酰胺進(jìn)行免疫抑制情況下，通過尾靜脈注射菌懸液的方法分別建立新生隱球菌系統(tǒng)感染模型。分別在感染后24h和72h后，取出組織，勻漿，分離菌株進(jìn)行培養(yǎng)，觀察各組小鼠主要臟器在感染早期的感染情況，記錄小鼠生存時間，進(jìn)行生存分析，從而比較免疫狀態(tài)和菌株hog1p基因?qū)Ω腥拘∈笊?/p>