變異鏈球菌htrA及clpP基因?qū)ζ渖L(zhǎng)特征影響的初步研究.pdf

1、目的:建立變異鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)株、htrA基因缺陷株、clpP基因缺陷株及htrA-clpP雙基因缺陷株的生長(zhǎng)模型，觀察比較幾種菌株在不同碳源條件下的生長(zhǎng)情況的差異；通過(guò)檢測(cè)試劑監(jiān)測(cè)各菌株在不同碳源培養(yǎng)基中生長(zhǎng)過(guò)程中消耗碳源情況的差異來(lái)分析比較clpP基因及htrA基因在變異鏈球菌生長(zhǎng)能力方面的功能。
　　方法:利用變異鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)株及前期實(shí)驗(yàn)構(gòu)建成功的htrA基因缺陷株、clpP基因缺陷株及htrA-clpP雙基因缺陷株，將其分別培養(yǎng)在

2、含有1％葡萄糖、1％蔗糖及無(wú)碳源的TPY培養(yǎng)基中，在37℃微需氧條件下培養(yǎng)，采用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀，以一定的時(shí)間間隔測(cè)定各菌株在各時(shí)間點(diǎn)的吸光度值(A值)分別確定各菌株在各培養(yǎng)條件下的生長(zhǎng)曲線，同時(shí)通過(guò)葡萄糖氧化酶法試劑盒及蒽酮-硫酸法測(cè)定各菌株在其生長(zhǎng)過(guò)程中的耗糖情況。分別比較各碳源條件下各菌株的生長(zhǎng)曲線和耗糖情況的差異。
　　結(jié)果:在含有l(wèi)％葡萄糖的普通TPY培養(yǎng)基中，缺陷株生長(zhǎng)的對(duì)數(shù)期較標(biāo)準(zhǔn)株短，且吸光度值的峰值明顯低于標(biāo)準(zhǔn)株(

3、P<0.05)。在整個(gè)生長(zhǎng)期三種缺陷株的OD值都較接近，無(wú)明顯差異。在對(duì)數(shù)期階段，三種缺陷株的耗糖量均明顯高于標(biāo)準(zhǔn)株，而進(jìn)入平臺(tái)期后各缺陷株與標(biāo)準(zhǔn)株的耗糖量逐漸接近，但在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)各種缺陷株與標(biāo)準(zhǔn)株耗糖量的差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。在蔗糖作為碳源的條件下培養(yǎng)時(shí)，各菌株吸光度值的峰值均高于葡萄糖條件下生長(zhǎng)時(shí)的同種菌株，標(biāo)準(zhǔn)株消耗蔗糖的量稍低于各缺陷株(p<0.05)，缺陷株的耗糖情況無(wú)明顯差異(p<0.05)。無(wú)碳源條件下，標(biāo)準(zhǔn)