SSR在普氏原羚個體識別和分子保護遺傳學中的應用.pdf

1、湖南農業(yè)大學碩士學位論文SSR在普氏原羚個體識別和分子保護遺傳學中的應用姓名：洪艷云申請學位級別：碩士專業(yè)：基礎獸醫(yī)指導教師：劉毅;李迪強20040501I n d i V i d u a lI d e n t i f i c a t i o na n d C o n s e r V a t i o n G e n t i c sS t u d i e si nP ，t D c 印陽p 朧w 口厶俺村U s i n gS S RA b

2、s t r a c tJ I ) 刑“妒r “p ，z 口w ““七f f i s e n d e m i ct o c h i n a ，a n dj u s t l i v e a ∞u n dQ i n g h a iL a k er e g i o n ，Q i n g h a i P r o V i n c e ，w i t } l a p o p u l a t i o n a b o u t 3 0 0 ，s o i t

3、w a s 印p o i n t e d a s C R ( C r i t i c a l l yE n d a n g e r e d ) i n t h e I U C N ( T h eW o r l d C o n s e r v a t i o n U n i o n ) R c dL i s t i n l9 9 6 ．T h cc o n s e 九r a t l o ng e n e t i c sr e s e a

4、r c hi s a k e ys t e pt oc o n s e r v et h ee n d 鋤g e r c ds p e c i e si ni n d i v i d u a li d e n t m c a t i o n ，p o p u l a t i o ns i z ee s t i m a t i o n ，p e d i 掣e e a l l a l y s i sa n d p o p u l a t i

5、 o n v i a b i l n y 吼a l y S i s ．F i r s to f a l l ，w ee x p l o r e da s e to f t e c h n i q u e sf o re x t r a c t i n gf e c a lE ) N A ，a I l de s t a b l i s h e dan e w e x t r a c c c dD N A m e t h o d s u c

6、 c e s s m l I y ’C o m p a ∞d t h ee x t r a c t e df e c a JD N A w i t l lb l o o dD N Aa n d s k i nD N A b ya g a re l e c t r o p h o r e s i s ，w ef o u I l dt h i sn e w m e t h o di se 鷦yo p e r a t eh i g l ly

7、i e l d ，p r a c t i c a b l ea n d s a f c t yt oo p e r a t o r b e c a u s e i tr e d u c e d c h a n c e t ot o u c h p o i s o n o u s c h e m i c a ld r u g s ，姐dt h em e t h o dw a sah i 曲v e r a c i t ya n dn o n

8、 - i n v a s i v eD N A t e c h n o l o g y ．T h e r e f o r e ，m i sn e we x m l c t c dD N A m e m o d i m p l yt h en o n —i n V 髂i V eD N A t e c h n o l o g yc 趾u s et os t u d yo f g e n e t i cd i v e r s i t yo f

9、 e n d a n g e r e d s p e c i e s ．M i c r o s a t e l l i t el o c u si sa h i g h l yv a r i a b l en u c l e a rm a r k e LT h e t 、Ⅳo s i d e so f t 1 1 es e q u e n c eo fm i c r o s a t e l l i t e m a r k e r s w

10、 e r e h i g h c o n s e r v a t i v e ，a n d s e q u e n c e s i n t t l e m i d m ep a r t w e m口o l y m o r p h i c ．T h u s m i c r o s a t e l l i t e m a f k c r s a r c o n e o ft l l e b e t t e r m o l e c l l l

11、 村m a r k e r s f o ri n t e 】r ．s p e c j e s g e n e t i cd i v e r s j t ys t u d ya n di n d j V j d I l a l a 1 1 a I y s j s ．I n o u rs t u d y ，1 Op o l y m o 礎i cm i c r o s a t e l l i t e D N A p r i m e r s 、

12、Ⅳh i c hi d e m i f i e di n G 陽耐舟伽№w e r ea m p l i f i e di nP 加c 印陽腫P w 口b 舡fg e n o m e s ，a n dw ef o u n dt h a t f i v e o ft l l e l o c i ( T G L A 5 4 ，B M l 3 9 2 ，0 a r f c b 3 0 4 ，S M H C C ，B M l 8 6 2 ) w

13、 e r e p o l y m o 叩h i c ．A t t h e s 鋤e t i m e ，w e u s e d l O p o l y m o r p h i cm i c r o s a t e l l i t eD N A p r i m e r si d e n t m e di ns h c e pt o 鋤p l i 匆訪，，D c q P r 口p 陀e w 口b 槲g e n o m e s ，m e a n

14、 l p l i f i e dr e s u l t ss h o w e dt h a t3l o c iw e f ep o l y m o r p l l i c ( M N S 6 l ，M N S “，O a r f c l 3 3 ) ．w bi d e n t i f i e di n d i v i d u a l sa n d t e s t c dm e g e n e t i cd i v e r s i t y

15、 i n3 9 P r 0 “驢，口∥z e w n 括船ff e c a ls a m p l e su s i n g m e s e e i g h tp o l y m o 神i c m i c m s a t c l l n c l o c i ．T h eP C R 鋤p l i f i e d p r o d u c 乜o f m i c r o s a t e l l i t el o c iw e r ed e t e

16、 c t e db yn o n ·d e n a t u r e dp o l y 扯r yl a m i d eg e Ie l e c 咖p h o ∞s i s ．T h er e s m t ss h o w e dt l l e s ef c c a ls 卸1 p l e sb e l o n g e d t o3 5d i f l ’e r e n ti n d i v i d u a l s ；、Ⅳec a

17、l c u l a t e d n 塢g e n e h e t e r o z y g o s i t y ’i n d i v i d u a l i d e n t i f i c 砒i o n p o t e n t i a l ，p o l y r n o r p h i s m i n f 0 蛐a t i o nc o n t e m ( P I C ) ’a n de f f e c t i v en u m b e r

18、o f a l l e l e so f e a c hl o c u s ．T h ev a l u e so f g e n eh e t e l ‘o z y g o s i t yw 粥O ．7 0 8 叫1 ．8 4 8 8 ，t h ev a l u e so f e f r e c t i v en u m b c ro f a l l e l e si s 3 _ 3 7 5 - 6 ．5 9 2 ，P I Ci sO

19、．6 5 7 一O ．7 8 9 ，1 r I ) P = O ．9 9 9 ；w h i c hs h o W e d t h e s el o c iw e r e h i g h p o l y m o r p l l i s m a n d f i t t c dt oi n d i v i d l l a l i d e n t i f i c a t i o n ．T h e s er e s u l t si m p l

20、i e dt h em i c r o s a t e l l i t eD N A m a r k e r s c o u l dh e l p 鯽Ⅱd ym e g e n e t i cd i V e r s i t yo f ∞d a f I g e r e ds p e c i e s ．F i I l a l l y ，w eu s e dM t D N A t oi d e n t 田s u c c e s s 釧ya 蛐

21、a l lc a p t i v eg a z e l l e ( L i n gL i n g ) i nt h eB i r d I s l a n d i nQ i n g h a iN a t i o 腿l N a t u r e R e s e r v e a n d a r 鋤t h a t w 姻f e d i nQ i n g h a i Z o o ．T h er e s u l ts h o w e d t l I

22、a tL i n gL i n g b e l o n g e d t om c 印M 胛e w 口抽腑‘蚰d 舳b e l o n g e d t oG 刪婦g H l l { 盯o s n ．K e y w o r d s ：P m c q p 陽p 圮e ⅥJ 礎舡f0i n d i V i d u a l i d e n t i f i c a t i o n ；m i c r o s a t e l l i t em a r