miR-569對肺癌細(xì)胞生物學(xué)功能的初步研究及其在肺癌血清中的表達(dá).pdf

1、目的:肺癌是全球最常見的惡性腫瘤之一，死亡率居世界首位。雖然近年來，以手術(shù)為主，放化療為輔的治療手段不斷發(fā)展，但總體治療效果仍欠佳。其主要是因?yàn)榇蟛糠址伟┗颊吲R床診斷已屬中晚期，且腫瘤轉(zhuǎn)移和多藥耐藥的現(xiàn)象。因此，亟需尋找一種可靠的早期診斷生物標(biāo)志物和有效的治療方案。目前，microRNA(miRNA)與腫瘤的研究不斷涌現(xiàn)，有望成為新型的抗癌武器。miR-569定位于3號(hào)染色體(3q26.2)，作為3q26.2擴(kuò)增子的一部分，可參與調(diào)節(jié)乳

2、腺癌和卵巢癌細(xì)胞的生存和增殖。而3q26.2擴(kuò)增也是肺癌最常見的染色體畸變之一，miR-569在肺癌中的表達(dá)及作用機(jī)制至今未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)首次揭示了miR-569在肺癌細(xì)胞中的表達(dá)情況及其對肺癌生物學(xué)特性的影響和可能的機(jī)制。在此基礎(chǔ)上，為了深入了解血清中miR-569的表達(dá)情況，我們檢測了肺癌患者的血清中miR-569的表達(dá)。
　　方法:1.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)的方法檢測肺癌細(xì)胞(A549、HCC827、H12

3、99、95D)和正常肺支氣管上皮細(xì)胞(HBE)中miR-569的表達(dá)。
　　2.為了明確miR-569對肺癌生物學(xué)特性的影響，在肺癌細(xì)胞A549中成功轉(zhuǎn)染miR-569模擬物(mimics)后，用CCK-8細(xì)胞增殖試劑盒和凋亡試劑盒分別檢測miR-569對A549細(xì)胞增殖和凋亡的影響。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測miR-569對A549細(xì)胞遷移的影響。
　　3.為了進(jìn)一步研究miR-569對肺癌的作用機(jī)制，首先借助生物信息學(xué)分析篩選出m

4、iR-569可能的靶基因。而后通過qRT-PCR和免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western Blot)進(jìn)一步驗(yàn)證miR-569對A549細(xì)胞c-FOS和高遷移率族蛋白A2(Highmobility group A2，HMGA2)基因和蛋白表達(dá)的影響。
　　4.2015年4月至2015年9月于大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院驗(yàn)科收集78例肺癌患者及正常對照者的血清標(biāo)本，通過qRT-PCR檢測肺癌患者相對于正常對照的血清中miR-569表達(dá)量，結(jié)合檢測結(jié)

5、果及臨床資料，采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)、卡方檢驗(yàn)及獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，分析其在肺癌血清中的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:1.miR-569在肺癌細(xì)胞(A549、HCC827、H1299、95D)中的表達(dá)水平明顯低于正常的肺上皮細(xì)胞(HBE)。
　　2.成功轉(zhuǎn)染miR-569 mimics的肺腺癌A549細(xì)胞的增殖受到抑制，凋亡率增加，而且細(xì)胞遷移也被阻遏。
　　3.A549細(xì)胞被成功轉(zhuǎn)染miR-569 mimics48h后，細(xì)胞中miR

6、-569表達(dá)水平顯著上調(diào)，而c-FOS、HMGA2的mRNA表達(dá)水平顯著降低，且c-FOS、HMGA2蛋白水平也顯著降低。
　　4.肺癌血清中miR-569的表達(dá)與正常對照者的血清相比有差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:miR-569在肺癌細(xì)胞中的表達(dá)與正常的肺支氣管上皮細(xì)胞相比明顯下調(diào)，且通過靶向調(diào)節(jié)c-FOS和HMGA2在肺癌細(xì)胞中起著抑癌基因的作用。miR-569有望成為肺癌治療的一個(gè)新的靶點(diǎn)。肺癌血清中miR-569的表