利用微衛(wèi)星標(biāo)記鑒定寡毛實(shí)蠅屬幼蟲及利用線粒體序列分析中國桔小實(shí)蠅種群結(jié)構(gòu)的研究.pdf

1、實(shí)蠅科 Tephritidae 昆蟲是雙翅目 Diptera 的大科之一，全世界已描述的種類超過 450 屬 4300 余種，其中包括地中海實(shí)蠅 Ceratitis capitata 在內(nèi)的70 余種是農(nóng)業(yè)上有重要經(jīng)濟(jì)意義的害蟲。實(shí)蠅的鑒定是國際果蔬貿(mào)易中最突出的技術(shù)問題之一，建立檢疫性實(shí)蠅特別是未成熟蟲態(tài)快速可靠的鑒定方法及掌握各種實(shí)蠅在中國的種群結(jié)構(gòu)與擴(kuò)散方向在植物檢疫上有重要的意義。 主要研究結(jié)果如下： I．本項(xiàng)研

2、究以國內(nèi)外普遍關(guān)注的檢疫性實(shí)蠅為研究對象，探索了微衛(wèi)星技術(shù)應(yīng)用于實(shí)蠅檢疫區(qū)分4 亞屬 9 種檢疫性實(shí)蠅（南瓜實(shí)蠅 Bactrocera tau、瓜實(shí)蠅 B. Cucurbitae、具條實(shí)蠅B. Scutellata、桔小實(shí)蠅B. Dorsalis、銹實(shí)蠅 B. Rubiginus、近黑顏實(shí)蠅B. Parater、顏帶實(shí)蠅 B. Cilifer、油橄欖實(shí)蠅 B. Oleae、地中海實(shí)蠅）的可行性與具體實(shí)驗(yàn)流程。從62對微衛(wèi)星引物中篩選出可

3、用于鑒定區(qū)分本研究4 亞屬 9 種檢疫性實(shí)蠅的26對微衛(wèi)星引物。并采用微衛(wèi)星位點(diǎn)擴(kuò)增情況0/1的組合進(jìn)行實(shí)蠅鑒定，只需4次PCR或6對微衛(wèi)星引物1次PCR即可將9種實(shí)蠅區(qū)分。這不僅大大加快了口岸檢疫的速度而且也加速了微衛(wèi)星技術(shù)在物種鑒定中的應(yīng)用。 II．測定了中國11個(gè)省15個(gè)種群85只桔小實(shí)蠅的mtDNA COI 基因部分序列，獲得長約 724bp的基因片段；統(tǒng)計(jì)得到桔小實(shí)蠅COI片段G+C占33﹪， A+T占67﹪，總體上明

4、顯表現(xiàn)出AT偏倚特征；在所有可用于比較的序列中共有71個(gè)變異位點(diǎn)，變異主要分布在密碼子第3位點(diǎn)，共有66個(gè)變異位點(diǎn)，占變異的92.96﹪。 Ⅲ.中國桔小實(shí)蠅遺傳差異主要存在于種群內(nèi)部，各地區(qū)間的基因交流較為充分，均有不同單倍型分布。15個(gè)種群的桔小實(shí)蠅共出現(xiàn)62種單倍型，其中6種單倍型為種群間共享單倍型，56種單倍型為各個(gè)種群所特有。由各單倍型的最大簡約網(wǎng)絡(luò)關(guān)系分析可見四川種群的單倍型SCP3、SCP4位于網(wǎng)絡(luò)關(guān)系的中心節(jié)點(diǎn)，且

5、單倍型SCP3為所有桔小實(shí)蠅單倍型的聚類起點(diǎn)，顯示該單倍型為中國桔小實(shí)蠅的祖先類型。四川攀枝花位于古北區(qū)與東洋區(qū)的分界線橫斷山區(qū)的東麓，這一特殊的地理位置，使得四川攀枝花有可能保存了桔小實(shí)蠅種群的原始類型，從而表明四川為我國桔小實(shí)蠅的種群起源地。由于我國省際間及我國與領(lǐng)國間頻繁的經(jīng)貿(mào)交流對桔小實(shí)蠅的擴(kuò)散也會有一定影響，因此桔小實(shí)蠅在我國的種群結(jié)構(gòu)的形成與演變很可能是一個(gè)受地理演化與經(jīng)貿(mào)交流這兩種因素的影響下不斷進(jìn)行的動態(tài)過程。本研究中桔