炎癥小體與肺癌及肺纖維化的相關(guān)性研究.pdf

1、肺癌是導(dǎo)致人類死亡的首要惡性腫瘤。據(jù)腫瘤學(xué)權(quán)威雜志CA:acancerjournal for clinicians報道，2014年美國所有新發(fā)腫瘤病例中，肺癌患者病例數(shù)占14％，在男性患者和女性患者中僅次于前列腺癌和乳腺癌所占比例;而在同年所有因腫瘤導(dǎo)致死亡的患者中，肺癌所占比例為27％，遠高于排第二位的前列腺癌(10％)和乳腺癌(15％)。在我國，國家癌癥登記中心(National CentralCancer Registry, NC

2、CR)2015年發(fā)布的中國腫瘤年報顯示，新發(fā)肺癌病例占2011年所有新發(fā)腫瘤病例的19.31％，肺癌致死病例占所有腫瘤致死病例的25.04％，其發(fā)生率和致死率均居各種腫瘤的首位。近年來，由于我國空氣污染、霧霾問題日趨嚴(yán)重，罹患呼吸系統(tǒng)疾病的人數(shù)逐年增長。盡管目前國內(nèi)尚未有大規(guī)模的流行病學(xué)研究霧霾與肺癌發(fā)生之間的關(guān)系，但2013年《柳葉刀-腫瘤學(xué)》（TheLancet Oncology）雜志發(fā)表的歐洲空氣污染對人群影響的多中心隊列研究(m

3、ulticentre European Study of Cohorts for Air Pollution Effects,ESCAPE)結(jié)果顯示，空氣中細(xì)顆粒物2.5（particulate matter2.5，PM2.5）及PM10含量升高可增加肺腺癌發(fā)生的風(fēng)險比(hazard ratio，HR)。隨著肺癌分子生物學(xué)研究的不斷深入，調(diào)控肺癌發(fā)生發(fā)展的分子生物學(xué)靶點不斷被發(fā)現(xiàn)，靶向肺癌細(xì)胞內(nèi)外信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程的分子靶向藥物越來越多的被應(yīng)

4、用于肺癌的臨床治療。盡管當(dāng)前分子靶向治療、基因治療、細(xì)胞免疫治療等新技術(shù)在肺癌治療中取得了較好的療效，但肺癌總體的5年生存率僅有16％。因此，探索并發(fā)現(xiàn)與肺癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)的重要分子靶點對于肺癌的預(yù)防、早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療，以及預(yù)后評估具有重要的意義。
　　長期反復(fù)發(fā)作的慢性炎癥是引起細(xì)胞發(fā)生惡變，導(dǎo)致腫瘤形成的重要原因。迄今為止，腫瘤相關(guān)性炎癥(cancer-related inflammastion)已成為學(xué)術(shù)界公認(rèn)的除

5、永生性、轉(zhuǎn)移性、無接觸抑制、生長信號過度激活、凋亡逃逸、持續(xù)的血管新生外腫瘤的第七種生物學(xué)特性。腫瘤相關(guān)性炎癥在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中主要表現(xiàn)在兩個方面:一方面，慢性炎癥反應(yīng)可通過破壞正常組織的基因穩(wěn)定性引起基因突變，促進原癌基因表達，抑制腫瘤免疫監(jiān)視等過程促進腫瘤發(fā)生(carcinogenesis);另一方面，某些類型的腫瘤在產(chǎn)生后可以誘導(dǎo)其生長的微環(huán)境中形成持續(xù)的炎癥反應(yīng)。無論腫瘤微環(huán)境中的炎癥反應(yīng)起源如何，其均可促進腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移以

6、及血管新生，并抑制特異性免疫細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的識別和殺傷，促進腫瘤耐藥形成。因此，發(fā)現(xiàn)“炎癌轉(zhuǎn)化”過程中的關(guān)鍵分子，一方面有助于抑制腫瘤相關(guān)性炎癥的形成，另一方面可為開發(fā)基于調(diào)控腫瘤相關(guān)性炎癥的治療藥物提供新靶點。
　　肺纖維化（pulmonary fibrosis）是彌漫性間質(zhì)性肺疾病的簡稱，是一種呼吸系統(tǒng)的常見疾病，其病理特征是肺泡壁（包括呼吸性細(xì)支氣管）彌漫性慢性炎癥和間質(zhì)纖維化。持續(xù)的慢性炎癥反應(yīng)是肺纖維化發(fā)生發(fā)展的主要機制

7、之一。此類疾病的早期反應(yīng)表現(xiàn)為肺泡和肺泡壁內(nèi)炎性反應(yīng)，形成肺泡炎。隨著疾病的進展，炎癥逐漸蔓延到鄰近的肺間質(zhì)部分和血管，并誘導(dǎo)纖維母細(xì)胞活化增殖，大量分泌纖維蛋白并沉積于肺間質(zhì)內(nèi)，產(chǎn)生間質(zhì)纖維化。隨著肺纖維化逐漸加重，肺組織破壞逐漸加劇，出現(xiàn)明顯的氣體交換功能損害，肺通氣功能降低，患者最終死于呼吸衰竭。引起肺纖維化的原因眾多，部分病因明確，其他則病因不明。目前，已知導(dǎo)致肺纖維化的明確的原因主要包括:職業(yè)或環(huán)境因素相關(guān)的無機或有機粉塵以及

8、有害化學(xué)物質(zhì)的吸入，如石棉、硅石、金屬顆粒、霉草塵、棉塵、煙塵、二氧化硫等;病毒、細(xì)菌、真菌、寄生蟲感染;某些特殊藥物及放射性損傷。由于我國空氣環(huán)境污染問題嚴(yán)重，人們在日常生活中吸入上述可誘導(dǎo)肺間質(zhì)纖維化的物質(zhì)的機會升高，從而導(dǎo)致肺間質(zhì)纖維化的發(fā)病率上升。除各種損傷、抗原物質(zhì)刺激引起的慢性炎癥反應(yīng)外，研究發(fā)現(xiàn)，肺泡毛細(xì)血管屏障基底膜完整性的破壞、上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的再生修復(fù)功能抑制、轉(zhuǎn)化生長因子-β(transformation gro

9、wth factor-β，TGF-β)信號功能異常均參與了肺間質(zhì)纖維化的形成。尤其值得注意的是，近年來的研究已經(jīng)證實，上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化(Endothelial-to-mesenchymal transition, EMT)是纖肺維化過程中重要的細(xì)胞機制。肺間質(zhì)纖維化的預(yù)后差，且目前尚無特效藥物能夠阻斷其疾病進程。因此，進一步深入研究肺纖維化的形成機制，發(fā)現(xiàn)參與調(diào)節(jié)肺纖維化進程的重要靶點，將有助于今后新型抗肺纖維化藥物的開發(fā)。

10、r>　　炎癥小體（inflammasome）是由細(xì)胞內(nèi)多種蛋白在內(nèi)源性或外源性應(yīng)激作用下組裝形成的復(fù)合體，其激活后可產(chǎn)生具有生物學(xué)活性的caspase-1，后者可進一步通過剪切作用激活炎癥因子IL-1β和IL-18。成熟的IL-1β和IL-18釋放至細(xì)胞外產(chǎn)生促炎作用?！把装Y小體”這一概念最早由Tschopp等人于2002年提出。經(jīng)典的炎性小體由三部分構(gòu)成:1）核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域(nucleotide-bindingoligomer

11、ization domain，NOD)樣受體(NOD-like receptors，NLR)或者黑色素瘤缺乏因子-2樣受體(absent in melanoma2-like receptor, ALR)，作為形成炎癥小體的框架蛋白或作為應(yīng)激信號感受器;2）凋亡相關(guān)斑點樣蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containinga CARD，ASC），在炎癥小體組裝過程中作為接頭蛋白;3）半

12、胱天冬蛋白酶-1（caspase-1），其經(jīng)剪切活化后可進一步剪切IL-1β和IL-18前體，形成成熟的IL-1β和IL-18?，F(xiàn)已證實，感染或損傷等因素導(dǎo)致炎癥小體的持續(xù)激活是形成慢性炎癥的重要分子生物學(xué)基礎(chǔ)。近年來的研究表明，炎癥小體在消化系統(tǒng)腫瘤、前列腺癌和黑素瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。然而，炎癥小體在肺癌的形成和發(fā)展過程中具有何種作用尚不明確。此外，已有的研究表明，二氧化硅（sillica，SiO2）晶體是誘導(dǎo)NLRP3

13、炎癥小體活化的激活劑之一。而二氧化硅顆粒是空氣污染物中的主要成分之一，并且是導(dǎo)致職業(yè)相關(guān)性肺纖維化的主要因素之一。動物實驗發(fā)現(xiàn)，敲除NLRP3基因可抑制小鼠吸入SiO2微粒所致的小鼠肺部肉芽腫形成，降低膠原沉積和肺纖維化。而作為肺間質(zhì)纖維化過程中的重要細(xì)胞調(diào)控機制，上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化(endothelial-to-mesenchymal transition，EMT)過程是否受NLRP3炎癥小體調(diào)控尚不明確。因此，本文第一部分工作

14、研究炎癥小體在人源性肺癌細(xì)胞株中的表達及活性;第二部工作分采用肺癌患者手術(shù)切除的肺癌標(biāo)本，研究炎癥小體在肺癌組織中的表達和活化情況;第三部分工作研究NLRP3炎癥小體在二氧化硅(SiO2) PM2.5顆粒誘導(dǎo)支氣管上皮細(xì)胞株發(fā)生上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)變（epithelial to mesenchymal transition，EMT）過程中的作用;第四部分工作使用肺活檢樣本研究NLRP3炎癥小體在一例利妥昔單抗（Rituximab，美羅

15、華）所致間質(zhì)性肺病中的作用。本文工作開拓了炎癥小體在呼吸系統(tǒng)疾病研究的新領(lǐng)域，深化了對炎癥小體病理生理學(xué)功能的認(rèn)識，揭示了炎癥小體是調(diào)節(jié)肺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的重要分子，并且在肺纖維化過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用，為研發(fā)針對腫瘤相關(guān)炎癥的治療和抗肺纖維化藥物提供新的靶標(biāo)。
　　第一部分炎癥小體在人肺癌細(xì)胞株中的表達
　　目的:研究不同亞型炎癥小體及活化產(chǎn)物在不同細(xì)胞類型、不同轉(zhuǎn)移能力以及不同化療敏感性的肺癌細(xì)胞株中的表達豐度及其活化

16、后產(chǎn)生炎癥因子IL-1β的能力。
　　方法:培養(yǎng)正常人源性肺泡上皮細(xì)胞株HPAEpiCs(human pulmonary alveolarepithelial cells)，正常人支氣管上皮細(xì)胞株16HBE(human bronchi epithelial cellline)，人肺泡上皮腺癌細(xì)胞株A549(human alveolar epithelial adenocarcinoma cellline)及耐順鉑A549/DDP細(xì)

17、胞株，人肺鱗癌細(xì)胞株SK-MES-1(human lungsquamous cell cancer line)，人大細(xì)胞肺癌低轉(zhuǎn)移能力95C細(xì)胞株和高轉(zhuǎn)移能力95D細(xì)胞株[human large-cell lung carcinoma cell lines with low(95C) or high(95D)metastatic potential]，人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株NCI-H446(human small cell lung can

18、cercell line);采用定量實時多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(quantitative real-time polymerase chainreaction，qRT-PCR)及蛋白質(zhì)印記法(Western blotting)測定構(gòu)成炎癥小體的不同組分，包括NOD樣受體NALP1，NLRP3，NLRC4，AIM2，ASC，caspase-1以及IL-1β和IL-18前體及成熟體的表達。采用炭疽致死因子(anthrax lethal factor

19、，LF)，短鏈同聚雙鏈DNA（double strained DNA，dsDNA）片段poly(dA∶dT)，脂多糖（lipopolysaccharides，LPS）聯(lián)合三磷酸腺苷(adenosine triphosphate，ATP)，鼠傷寒沙門氏菌鞭毛蛋白（flagellin from S.typhimurium）分別活化各細(xì)胞株內(nèi)的NALP1，AIM2，NLRP3及NLRC4炎癥小體，測定細(xì)胞上清液中IL-1β水平。
　　結(jié)

20、果:構(gòu)成炎癥小體的不同組分在正常肺源性細(xì)胞株及肺癌細(xì)胞株內(nèi)均有表達。其中，NALP1高表達于16HBE、A549及NCI-H446細(xì)胞株，中等表達于A549/DDP、SK-MES-1及95D細(xì)胞株，低表達于HPAEpiCs及95C細(xì)胞株;AIM2高表達于非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株;NLRP3高表達于A549、95C、95D及NCI-H446細(xì)胞株;NLRC4在各細(xì)胞株間表達水平經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗差異無顯著性;ASC在A549、95D及NCI-H446

21、細(xì)胞株中表達水平顯著高于兩種正常肺源性細(xì)胞株（HPAEpiCs和16HBE）;pro-caspase-1、pro-IL-1β和pro-IL-18 mRNA在各組細(xì)胞株表達水平差異統(tǒng)計學(xué)檢驗無顯著性，但在肺癌細(xì)胞株中caspase-1活化體p10及IL-1β和IL-18成熟體蛋白水平顯著高于正常肺源性細(xì)胞株。值得注意的是，在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株中，鱗癌細(xì)胞株SK-MES-1表達AIM2、NLRP3、ASC、caspase-1活化體、IL-1

22、β和IL-18成熟體的蛋白水平低于腺癌A549及大細(xì)胞肺癌95D細(xì)胞株;耐順鉑A549/DDP細(xì)胞株表達AIM2、NLRP3、ASC及IL-1β和IL-18成熟體的蛋白水平顯著低于野生型A549細(xì)胞株;低轉(zhuǎn)移性大細(xì)胞肺癌95C細(xì)胞株表達NALP1、AIM2、ASC、caspase-1活化體、IL-1β和IL-18成熟體的蛋白水平顯著低于高轉(zhuǎn)移性大細(xì)胞肺癌95D細(xì)胞株。ELISA結(jié)果顯示，各種細(xì)胞株內(nèi)的炎癥小體激活后均可釋放IL-1β，肺

23、癌細(xì)胞釋放能力強于正常細(xì)胞，且NLRP3炎癥小體激活后釋放IL-1β的能力高于其他亞型的炎癥小體。
　　結(jié)論:炎癥小體差異性表達于肺癌細(xì)胞株，其主要表達亞型及表達水平與肺癌細(xì)胞株的細(xì)胞學(xué)類型、轉(zhuǎn)移能力及化療敏感性相關(guān);表達于肺癌細(xì)胞株的不同亞型炎癥小體可被相應(yīng)的激活劑活化，促進炎癥因子IL-1β的釋放。
　　第二部分炎癥小體在手術(shù)切除的Ⅰ期肺癌組織中的表達
　　目的:研究不同亞型炎癥小體及其活化產(chǎn)物在手術(shù)切除的Ⅰ期肺鱗

24、癌、腺癌及局限期小細(xì)胞肺癌樣本中的表達水平，揭示肺癌病灶內(nèi)炎癥小體與不同病理類型肺癌的相關(guān)性。
　　方法:從南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤樣品組織庫中調(diào)取液氮凍存的2011年1月至2012年12月間手術(shù)切除的Ⅰ期肺癌患者（小細(xì)胞肺癌為局限期患者）肺組織樣本用于qRT-PCR研究，包含17例鱗狀細(xì)胞癌(squamous cell cancer,SCC);20例低級別肺腺癌（Ⅰ-Ⅱ級，low-grade adenocarcinoma,

25、low-grade ADC）;16例高級別肺腺癌（Ⅲ-Ⅳ級，high-grade adenocarcinom，high-grade ADC）;8例小細(xì)胞肺癌(small cell lung cancer, SCLC);同時每組中隨機選取5例腫瘤樣本的癌旁正常組織（共計20例）組成對照組。此外，從我院病理科另外選取各4例上述病理類型肺癌手術(shù)切除組織的石蠟切片進行免疫組化研究。通過免疫組織化學(xué)、qRT-PCR及Western blottin

26、g法檢測構(gòu)成炎癥小體的不同蛋白，包括NALP1、AIM2、NLRP3、NLRC4、ASC、caspase-1以及IL-1β和IL-18的表達。
　　結(jié)果:在癌旁正常組織中，構(gòu)成炎癥小體的NALP1、AIM2、NLRP3、NLRC4、ASC、caspase-1、IL-1β及IL-18表達水平低。qRT-PCR可檢測出NALP1及NLRC4在不同組織中的mRNA表達，且各組織中mRNA的含量統(tǒng)計學(xué)檢驗差異無顯著性，但免疫組化研究在癌旁

27、正常組織及各肺癌組織中均未檢測出NALP1及NLRC4的陽性表達信號。AIM2、NLRP3及ASC在肺癌組織中的表達量顯著高于癌旁正常組織。AIM2高表達于腺癌樣本，中度表達于鱗癌樣本，在小細(xì)胞肺癌組織中表達量低;NLRP3及ASC在高級別腺癌組織中表達量最高，中度表達于低級別腺癌組織及小細(xì)胞肺癌組織，在鱗癌樣本中表達量相對較低。Caspase-1、IL-1β及IL-18成熟體在肺癌細(xì)胞組織中的表達水平顯著高于癌旁組織，且以高級別腺癌組

28、織中表達水平為最高。
　　結(jié)論:炎癥小體高表達于肺癌組織，且與腫瘤病理類型相關(guān)。肺腺癌組織中炎癥小體表達水平高于鱗癌，且高級別肺腺癌表達水平最高。表明高級別肺腺癌中炎癥小體介導(dǎo)的腫瘤相關(guān)性炎癥反應(yīng)強于其他類型肺癌。
　　第三部分 NLRP3炎癥小體在二氧化硅PM2.5誘導(dǎo)的支氣管上皮16HBE細(xì)胞株EMT中的作用
　　目的:研究公認(rèn)的NLRP3炎癥小體活化劑之一——二氧化硅2.5μm細(xì)顆粒物(SiO2 PM2.5)是否

29、能誘導(dǎo)支氣管上皮細(xì)胞16HBE細(xì)胞株發(fā)生EMT現(xiàn)象，并初步探索NLRP3炎癥小體在這一過程中的作用及相關(guān)機制，揭示NLRP3炎癥小體在SiO2誘導(dǎo)的肺纖維化早期事件EMT過程中的可能作用。
　　方法:將不同濃度SiO2 PM2.5加入16HBE細(xì)胞培養(yǎng)基中，采用CCK8法測定測定SiO2 PM2.5作用不同時間（24，48，72小時）對16HBE細(xì)胞活力的影響;檢測EMT發(fā)生率及EMT標(biāo)志性分子E-鈣黏蛋白（E-cadherin）

30、、α-平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）表達變化，評估SiO2PM2.5是否能夠誘導(dǎo)16HBE發(fā)生EMT;同時測定16HBE細(xì)胞內(nèi)NLRP3炎癥小體活化水平;確定可引起16HBE細(xì)胞發(fā)生EMT效應(yīng)及NLRP3炎癥小體活化的合適SiO2 PM2.5濃度和作用時間。采用慢病毒轉(zhuǎn)染短發(fā)卡樣RNA（short hairpin RNA，shRNA）下調(diào)16HBE細(xì)胞中NLRP3表達;研究抑制NLRP3表達對S

31、iO2 PM2.5誘導(dǎo)16HBE發(fā)生EMT效應(yīng)及NLRP3炎癥小體活化的影響。通過Western blotting法檢測EMT過程中主要信號分子Smad2/3，GSK3β，β-catenin及Sanil的表達情況，揭示相關(guān)分子生物學(xué)機制。
　　結(jié)果:SiO2 PM2.5對16HBE細(xì)胞具有濃度和時間依賴性的毒性作用，在損傷細(xì)胞的同時可濃度和時間依賴性的誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞發(fā)生EMT現(xiàn)象。SiO2PM2.5在誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞發(fā)生EM

32、T效應(yīng)的同時可激活細(xì)胞內(nèi)NLRP3炎癥小體;相同濃度的SiO2 PM2.5可時間依賴性的促進NLRP3炎癥小體活化并釋放成熟的IL-1β和IL-18。下調(diào)NLRP3表達后能顯著抑制SiO2 PM2.5誘導(dǎo)的16HBE細(xì)胞發(fā)生EMT效應(yīng)，同時抑制NLRP3炎癥小體表達及活化過程，表現(xiàn)為NLRP3上調(diào)被阻斷，caspase-1活化被減弱，但不能抑制細(xì)胞外液中的IL-1β和IL-18水平升高。分子生物學(xué)研究顯示，下調(diào)NLRP3表達可能通過抑制

33、細(xì)胞內(nèi)Smad2/3-Snail信號傳導(dǎo)過程而減輕SiO2 PM2.5誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞發(fā)生EMT。
　　結(jié)論:SiO2 PM2.5可誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞發(fā)生EMT效應(yīng)的同時活化細(xì)胞內(nèi)NLRP3炎癥小體。下調(diào)NLRP3的表達可抑制SiO2 PM2.5對16HBE細(xì)胞EMT的誘導(dǎo)作用。NLRP3炎癥小體的這一作用可能是通過調(diào)節(jié)Smad2/3-Snail信號通路實現(xiàn)。因此，調(diào)控NLRP3炎癥小體的表達和功能可能是預(yù)防和治療空氣污染顆粒物

34、質(zhì)對肺組織損傷、誘導(dǎo)肺纖維化及肺癌過程的有效策略。
　　第四部分 NLRP3炎癥小體在利妥昔單抗所致間質(zhì)性肺病中的作用（臨床病例研究1例）
　　目的:研究利妥昔單抗(Rituximab，美羅華)所致間質(zhì)性肺?。╮ituximab-induced interstitial lung disease，R-ILD）的病理學(xué)改變及NLRP3炎癥小體在患者肺部病灶中的表達與分布，揭示外周血中炎癥小體相關(guān)因子IL-1β及IL-18與肺部

35、影像學(xué)改變的關(guān)系，為研究此類疾病的發(fā)病機制和藥物治療學(xué)機制提供分子生物學(xué)基礎(chǔ)。
　　方法:通過使用糖皮質(zhì)激素及抗感染藥物搶救一例因使用利妥昔單抗治療特發(fā)性血小板減少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura, ITP）導(dǎo)致R-ILD合并呼吸衰竭患者;采集患者外周血，采用ELISA方法測定血清中IL-1β及IL-18水平在治療過程中的動態(tài)變化;使用高分辨率CT(high resolution CT

36、，HRCT)動態(tài)觀察患者肺部病灶恢復(fù)情況;患者病情改善，肺部病灶經(jīng)治療后部分吸收時，與患者及家屬溝通簽署知情同意，行電視輔助胸腔鏡手術(shù)(video-assistedthoracoscopic surgery，VATS)取患者肺內(nèi)病變殘留部位及恢復(fù)部位肺組織行病理學(xué)檢查;采用天狼星紅染色及免疫組織化學(xué)染色法研究肺組織內(nèi)纖維化改變及NLRP3、ASC、caspase-1在肺組織病損部位及恢復(fù)部位中的表達。
　　結(jié)果:患者呼吸衰竭經(jīng)使用

37、糖皮質(zhì)激素及抗感染治療后被糾正;HRCT檢查顯示患者肺部病灶在治療5天后部分吸收，治療14天后病灶明顯吸收，治療45天后幾乎完全吸收;治療5天后行VATS肺活檢病理學(xué)結(jié)果顯示，患者肺部病變?yōu)榉翘禺愋蚤g質(zhì)性肺炎(nonspecific interstitial pneumonia，NSIP)，肺間質(zhì)內(nèi)見大量CD19陽性B淋巴細(xì)胞與漿細(xì)胞浸潤;天狼星紅染色可見病變部位肺間質(zhì)內(nèi)大量膠原纖維堆積;免疫組化染色結(jié)果可見NLRP3、ASC、casp

38、ase-1在肺組織病變部位中高表達。上述病理學(xué)改變在活檢肺組織恢復(fù)部位中消失。ELISA結(jié)果顯示，患者外周血中IL-1β及IL-18水平隨治療時間逐漸降低。
　　結(jié)論:NLRP3炎癥小體參與R-ILD的發(fā)生過程;糖皮質(zhì)激素治療能有效抑制R-ILD過程中肺內(nèi)NLRP3炎癥小體活化并逆轉(zhuǎn)R-ILD過程中肺間質(zhì)膠原纖維沉積;外周血中IL-1β及IL-18水平與肺組織內(nèi)間質(zhì)性病變恢復(fù)過程存在時間上的相關(guān)性，可能成為監(jiān)測藥物源性肺間質(zhì)病變的

39、分子標(biāo)志物。
　　綜上所述，本研究工作的主要創(chuàng)新之處:
　　1.發(fā)現(xiàn)不同類型肺癌細(xì)胞株與組織中炎癥小體的表達情況，為肺癌中腫瘤相關(guān)性炎癥提供依據(jù);
　　2.揭示炎癥小體與肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移性、耐藥性以及細(xì)胞病理學(xué)之間的關(guān)系，為今后開發(fā)靶向調(diào)控炎癥小體表達和功能的新型肺癌輔助治療藥物提供新的靶點;
　　3.初步闡明NLRP3炎癥小體在SiO2 PM2.5誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生EMT作用中的調(diào)節(jié)作用，為今后使用NLRP3炎癥小體抑制