GABAB受體介導(dǎo)的Gα13-Rac1信號通路的研究.pdf

1、γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，GABA)是一種主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，且在神經(jīng)系統(tǒng)中起著重要的調(diào)節(jié)作用。GABAB受體為代謝型受體，屬C族G蛋白偶聯(lián)受體（G-protein coupled receptor，GPCR)的成員。作為神經(jīng)遞質(zhì)受體的GABAB受體其經(jīng)典的信號通路是通過偶聯(lián)Gαi/o亞基來發(fā)揮作用的，但是否還能通過偶聯(lián)其他亞基來發(fā)揮作用目前仍不清楚。Gα12/13所調(diào)節(jié)的信號通路參與到了大量的生理學(xué)過程，

2、包括胚胎發(fā)育，細(xì)胞生長，細(xì)胞極化和遷移，血管生成，血小板的生成，免疫應(yīng)答，細(xì)胞凋亡和神經(jīng)元反應(yīng)。Rac1信號通路可和肌動蛋白應(yīng)力纖維以及粘附斑形成有關(guān)，還能夠促進(jìn)細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)重組，以及調(diào)節(jié)片狀偽足與絲狀偽足伸延，同時(shí)極大的影響細(xì)胞的極化，加強(qiáng)細(xì)胞遷移，同時(shí)，在神經(jīng)細(xì)胞的存活，凋亡以及突觸生長過程中也起著核心作用。
　　為了研究GABAB受體中Gα13亞基與Rac1信號通路之間的關(guān)系，本文以小鼠小腦顆粒神經(jīng)元細(xì)胞(cerebella

3、r granule neurons,CGNs）和小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（mouse embryonic fibroblasts MEF WT，Gα12/13-/-）為研究對象開展如下工作。用GABAB受體的特異性激動劑baclofen(簡稱bac）和別構(gòu)調(diào)節(jié)劑CGP7930處理CGNs，研究GABAB受體與Gα13的關(guān)系。bac處理CGNs不同時(shí)間，研究GABAB受體與Rac1的關(guān)系。Gαi/o抑制劑PTX預(yù)處理CGNs，研究GABAB受體

4、介導(dǎo)的Rac1的激活與Gαi/o的關(guān)系。最后用bac處理MEF WT和Gα12/13-/-缺失的MEF細(xì)胞（Gα12/13-/-）不同時(shí)間，以及Gα13 SiRNA干擾MEF WT中Gα13的表達(dá)后，通過GST-PAK pulldown實(shí)驗(yàn)和GTPγS激活實(shí)驗(yàn)檢測Rac1激活。研究發(fā)現(xiàn)GABAB受體能瞬時(shí)激活Gα13和Rac1，且Rac1的激活程度在10 min達(dá)到最高然后降低。而GABAB受體介導(dǎo)的Rac1的激活是Gαi/o非依賴的。