BTB基因家族成員BTBD8、KLHL7和KLHL9的克隆和功能研究.pdf

1、BTB結(jié)構(gòu)域和kelch結(jié)構(gòu)域都是在進(jìn)化上高度保守的結(jié)構(gòu)域，廣泛存在于從酵母到人類的各種物種中。在人類基因組中發(fā)現(xiàn)了很多BTB/kelch蛋白，提示這類蛋白功能的重要性和多樣性。現(xiàn)在越來越多的實(shí)驗(yàn)證據(jù)證明BTB/kelch蛋白在胞質(zhì)分裂、細(xì)胞骨架功能維持、細(xì)胞周期調(diào)控、腫瘤發(fā)生、神經(jīng)發(fā)育等重要生理過程中都起了重要的作用。BTB結(jié)構(gòu)域的主要功能是介導(dǎo)蛋白相互作用，它在PLZF和BCL6等轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控和參與Cul3介導(dǎo)的泛素途徑中都有

2、重要作用。kelch蛋白是近年來發(fā)現(xiàn)的一類新的細(xì)胞骨架結(jié)合蛋白，可以與actin細(xì)胞骨架作用從而對細(xì)胞骨架功能進(jìn)行調(diào)控。更多的研究表明kelch結(jié)構(gòu)域的功能多樣化，參與了一系列重要的信號傳導(dǎo)途徑，在細(xì)胞周期調(diào)控和腫瘤發(fā)生中都發(fā)揮了重要作用。 　　從本實(shí)驗(yàn)室的高質(zhì)量人胎腦文庫中克隆得到了三個(gè)含有BTB結(jié)構(gòu)域的新成員：BTBD8、KLHL7和KLHL9，并且KLHL7和KLHL9同時(shí)含有kelch-repeat結(jié)構(gòu)域。通過信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)我

3、們得到的BTBD8、KLHL7和KLHL9的cDNA均為全長形式，它們分別編碼含有305個(gè)氨基酸、538個(gè)氨基酸和617個(gè)氨基酸的蛋白，并且都含有保守的BTB結(jié)構(gòu)域和kelch結(jié)構(gòu)域。通過Northern雜交、RT-PCR和原位雜交等實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)了它們各自特異的表達(dá)譜模式。利用免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)確定了KLHL7和KLHL9都能與actin結(jié)合，提示KLHL7和KLHL9可能在維持細(xì)胞骨架功能和參與骨架信號傳導(dǎo)中有重要作用。 　　利用酵母雙雜