一個ZM401基因家族新成員（ZM908）的克隆及其功能研究.pdf

1、本研究從以ZM401cDNA片段為探針，在玉米基因組文庫中篩選出的陽性噬菌體克隆入手，采用亞克隆的方法，從其中一個908陽性噬菌體中獲得了1822bp的序列?；蚍治鲲@示這段序列含1215bp，命名為ZM908；采用生物學(xué)軟件對ZM908序列和結(jié)構(gòu)進行分析，表明該基因缺乏明顯的開放閱讀框架，序列中最長可能的開放閱讀框架僅編碼98個氨基酸，具有poly(A)尾部結(jié)構(gòu)，RNA分子具有穩(wěn)定的二級結(jié)構(gòu)，符合非編碼RNA基因的特點，可能屬于類似于

2、mRNA的非編碼基因；ZM908與ZM401有高度保守的區(qū)段(ZM908序列中有三段和ZM401是高度保守的，分別為371-598bp，698-847bp和929-1047bp)，相似性最高達到86％。玉米花粉的RT-PCR結(jié)果證明ZM908在玉米中是可轉(zhuǎn)錄的，玉米基因組Southern雜交結(jié)果表明，ZM908以單拷貝存在于玉米基因組中?！　檠芯縕M908基因的功能，構(gòu)建了35S啟動子控制下的ZM908基因正向及反向的植物表達載體，

3、經(jīng)農(nóng)桿菌介導(dǎo)，轉(zhuǎn)化煙草和擬南芥。經(jīng)PCR檢測，得到T0代正向和反向轉(zhuǎn)基因煙草為30株和4株；T2代正向和反向轉(zhuǎn)基因擬南芥植株為14株和6株。對轉(zhuǎn)正向ZM908基因煙草觀察發(fā)現(xiàn)：花序生長緩慢，在生長過程中有脫落的現(xiàn)象發(fā)生；花粉呈黃褐色，大小不一致，并且萌發(fā)率很低，而ZM908基因以反向方式整合的轉(zhuǎn)基因煙草表現(xiàn)一切正常。對轉(zhuǎn)基因擬南芥表型觀察顯示，轉(zhuǎn)正向ZM908基因的擬南芥與非轉(zhuǎn)基因的沒有差別，花粉的掃描電鏡觀察顯示轉(zhuǎn)基因花粉除略有些凹陷