腸球菌多藥耐藥基因簇檢測(cè)、定位及菌株分型研究.pdf

1、腸球菌是重要的病原菌，能夠引起泌尿系統(tǒng)、皮膚軟組織等多種臟器的感染，嚴(yán)重時(shí)還能引發(fā)敗血癥、心內(nèi)膜炎、腦膜炎等致死疾病。近年來，抗菌藥物在醫(yī)院臨床和獸醫(yī)臨床上的長(zhǎng)期過度使用使得腸球菌的耐藥問題越來越嚴(yán)重，已成為全球人類健康面臨的嚴(yán)重問題之一。多藥耐藥基因的存在及傳播加大了臨床治療腸球菌感染性疾病的難度。因此，研究腸球菌耐藥性產(chǎn)生、傳播機(jī)制及毒力基因攜帶情況為臨床治療腸球菌感染性疾病提供指導(dǎo)性意義。
　　本研究以96株豬源和人源腸球菌

2、為基礎(chǔ)，對(duì)腸球菌進(jìn)行種屬間的鑒定，共分四個(gè)種，糞腸球菌最多，占總體菌株的52.1％（50/96）；其次為屎腸球菌，共42株，占43.8%；3株鉛黃腸球菌和1株鶉雞腸球菌。對(duì)96株腸球菌進(jìn)行11種常見抗菌藥物敏感性實(shí)驗(yàn)并檢測(cè)其攜帶耐藥基因情況，96株腸球菌對(duì)萬古霉素均不耐藥，大部腸球菌對(duì)四環(huán)素、紅霉素和慶大霉素表現(xiàn)耐藥，耐藥率分別為86.5%，83.3%和76.0%；對(duì)利福平和夫西地酸的耐藥率相對(duì)較低，分別為35.4%和23.9%；對(duì)環(huán)丙

3、沙星、氟苯尼考、氯霉素等藥物的耐藥率均在57%以上。對(duì)耐藥基因的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，多個(gè)菌株攜帶多種耐藥基因，選取一株進(jìn)行全基因組的測(cè)序發(fā)現(xiàn)其攜帶氨基糖苷類耐藥基因簇。用PCR對(duì)96株腸球菌攜帶該耐藥基因簇的情況進(jìn)行考察，共檢出23株陽性腸球菌，陽性率23.9%。另外，本研究還考查了腸球菌攜帶毒力基因esp、cylM的情況，其中人源腸球菌esp的陽性率高達(dá)96.8%。
　　為了考查耐藥基因簇的傳播及在基因組中的位置，本研究進(jìn)行了 MLST和

4、PFGE菌株分型，接合實(shí)驗(yàn)、S1-PFGE、Southern雜交。結(jié)果表明23株腸球菌中共分為8個(gè)ST型， PFGE譜型中存在相似的譜型，但大多數(shù)菌株的PFGE譜型不同，菌株間的譜型差別較大。MLST和PFGE分型結(jié)果中相同來源的腸球菌存在分型一樣的菌株，有克隆相關(guān)性，但是豬源和人源腸球菌之間暫無發(fā)現(xiàn)關(guān)聯(lián)性。人源腸球菌耐藥基因簇沒有發(fā)現(xiàn)接合想象，而豬源腸球菌可接合，耐藥基因簇存在水平傳播的可能性。
　　通過S1-PFGE與Sout