Mdrl的定量檢測及多藥耐藥相關(guān)基因的研究.pdf

1、目的:在LightCycler PCR儀上對多藥耐藥基因(mdrl)定量測定的方法和臨床應(yīng)用進行探討,通過對耐藥/非耐藥急淋患者差異表達(dá)基因的篩選來探索多藥耐藥的分子病理機制,并對部分功能明確的基因在耐藥中的作用進行驗證.方法:在LightCycleR PCR儀上建立了熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)檢測多藥耐藥基因(mdrl)的技術(shù)方法,并應(yīng)用該方法檢測了30例急性白血病患者和8例正常人外周血mdrl基因的表達(dá).根據(jù)mdrl基因表達(dá)水平并

2、結(jié)合臨床將6例急淋分為耐藥組和非耐藥組,每組各3人,用含有4096個人類已知基因的cDNA表達(dá)譜芯片檢測兩組之間差異表達(dá)的基因,并選擇其中高表達(dá)的細(xì)胞周期蛋白B1基因,根據(jù)Genbank中所查人細(xì)胞周期蛋白B1和β-actin基因組序列,分別設(shè)計兩對引物,應(yīng)用半定量逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)檢測了14例耐藥急性白血病患者和13例非耐藥急性白血病患者外周血細(xì)胞周期蛋白B1基因的表達(dá)水平.結(jié)果:利用熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)檢測mdrl的實驗方

3、法標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好(r=1.0),耐藥組mdrl基因拷貝數(shù)與非耐藥組有顯著性差異(P<0.01),正常人亦有低水平mdrl基因的表達(dá).基因芯片兩次重復(fù)檢測顯示耐藥組較之非耐藥組共出現(xiàn)了150個差異表達(dá)基因,其中有83個基因低表達(dá),67個基因高表達(dá),這些差異表達(dá)的基因涉及到生命活動的諸多方面,如細(xì)胞生長、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、離子轉(zhuǎn)運、細(xì)胞間信息傳導(dǎo)等.RT-PCR半定量結(jié)果顯示耐藥組與非耐藥組相比,細(xì)胞周期蛋白B1基因表達(dá)水平有顯著性升高

4、.結(jié)論:熒光逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)是一種可靠的定量方法,能迅速、特異地檢測腫瘤標(biāo)本中的mdrl,為臨床化療用藥、預(yù)防MDR發(fā)生、考核逆轉(zhuǎn)MDR效果等提供了有價值的量化指標(biāo);采用cDNA芯片有助于平行、高通量地篩選細(xì)胞多藥耐藥相關(guān)基因,可為多藥耐藥的分子病理機制研究提供新的手段;細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)異?？赡苁嵌嗨幠退幍姆肿硬±頇C制之一,細(xì)胞周期蛋白B1基因可作為判斷AL患者耐藥的指標(biāo),對判斷AL的預(yù)后具有一定的價值.mdrlm