多藥耐藥相關(guān)基因ERGIC-53和hTNF-α逆轉(zhuǎn)耐藥的研究.pdf

1、　　本文對(duì)腫瘤化療中多藥耐藥相關(guān)基因ERGIC-53和hTNF-α逆轉(zhuǎn)耐藥進(jìn)行了研究。文章利用cDNAarray等技術(shù)篩選出幾個(gè)可能的耐藥相關(guān)新基因，運(yùn)用RNA干擾等技術(shù)研究其中的ERGIC-53基因在腫瘤耐藥細(xì)胞系中的表達(dá)及可能參與的耐藥機(jī)制，并檢測(cè)它在血液病臨床病例中的表達(dá)，為臨床耐藥腫瘤診斷及治療提供新靶點(diǎn)；克隆表達(dá)了hTNF-α并研究了它對(duì)耐藥腫瘤細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)作用。研究中采用RNA干擾技術(shù)，設(shè)計(jì)合成了ERGIC-53基因的兩對(duì)寡核

2、苷酸模板，應(yīng)用體外轉(zhuǎn)錄方法，經(jīng)轉(zhuǎn)錄、雜交、純化步驟得到較高產(chǎn)量的siRNA，轉(zhuǎn)染K562/A02細(xì)胞后，通過(guò)RT-PCR技術(shù)觀察到ERGIC-53基因mRNA水平顯著下降，在48hr時(shí)基本被抑制。本研究從經(jīng)PMA誘導(dǎo)的HL60細(xì)胞中成功克隆了hTNF-α基因，并在原核表達(dá)系統(tǒng)內(nèi)獲得了高效、穩(wěn)定表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)抗E-tag親和層析純化，獲得高純度高活性的TNF-α融合蛋白，為研究TNF-α的抗腫瘤作用和下一步制備針對(duì)TNF-α單克隆抗體，