經(jīng)hBMP-2基因修飾的兔BMSCs生物學(xué)活性研究.pdf

1、背景：下頜骨是位于面部下1/3的不規(guī)則骨，參與咀嚼、咬合、吞咽等重要生理活動。下頜骨的缺損修復(fù)一直是頜面外科研究的熱點之一。隨著組織工程學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，下頜骨缺損后修復(fù)重建的治療方法也得到了極大的進步。其中，組織工程骨技術(shù)因在下頜骨修復(fù)重建中展現(xiàn)出顯著的優(yōu)越性，已經(jīng)逐漸得到廣泛的認可。在組織工程學(xué)中，種子細胞、支架材料、細胞因子是其三大要素，而獲得具有良好生物學(xué)活性的種子細胞是組織工程研究的基礎(chǔ)性環(huán)節(jié)。本研究擬通過RT-PCR技術(shù)從人

2、肝癌細胞系HepG2中獲取并擴增人骨形態(tài)蛋白-2（hBMP-2）基因片段，通過酶切等技術(shù)將其插入至骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSCs）基因組中，從而增強BMP基因的表達活性，加快骨質(zhì)缺損區(qū)域的修復(fù)重建，為后續(xù)實驗奠定基礎(chǔ)。
　　目的：初步分離培養(yǎng)生長狀態(tài)良好的兔BMSCs，檢測經(jīng)BMP-2基因修飾后，BMSCs中目的基因的表達水平，并探討將其作為種子細胞修復(fù)骨缺損的可行性。
　　方法：通過密度梯度離心法分離培養(yǎng)兔BMSCs，并初步

3、檢測BMSCs生物學(xué)特性。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）技術(shù)，從HepG2細胞中分離獲取hBMP-2基因片段。目的基因片段經(jīng)擴增后與載體連接，構(gòu)建重組質(zhì)粒，將重組質(zhì)粒經(jīng)慢病毒載體，并通過293T細胞介導(dǎo)轉(zhuǎn)染BMSCs，檢測轉(zhuǎn)染后BMSCs細胞中BMP-2基因的mRNA和蛋白表達情況。
　　結(jié)果：通過密度梯度離心法分離培養(yǎng)，得到生長狀況良好，可以穩(wěn)定傳代的兔BMSCs；通過目的基因的提取、擴增及連接等實驗過程成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒載