Sox-9基因修飾BMSCs復(fù)合骨支架材料構(gòu)建組織工程椎間盤的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本研究利用異種骨制備的脫細(xì)胞脫鈣骨組織工程復(fù)合多孔支架，將傳代培養(yǎng)的Sox-9基因修飾后SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞種植于其中，并在Ba lb/c裸鼠皮下進(jìn)行移植，檢測(cè)細(xì)胞支架復(fù)合物的理化性能和生物相容性，探討其成為組織工程椎間盤的可行性，為椎間盤組織工程的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：（1）復(fù)蘇Sox-9基因修飾的SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，采用常規(guī)辦法對(duì)其進(jìn)行傳代培養(yǎng)，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。同時(shí)將已經(jīng)制作成型的骨支架消毒，

2、放入無菌的24孔板中，將已經(jīng)進(jìn)行過脫壁處理的基因修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接種于支架上，體外培養(yǎng)48小時(shí)，倒置顯微鏡、掃描電鏡、組織學(xué)染色觀察細(xì)胞在支架上的粘附情況。（2）細(xì)胞支架復(fù)合物體外培養(yǎng)2天后，分實(shí)驗(yàn)側(cè)和對(duì)照側(cè)將其植入Balb/c裸鼠背部皮下。體內(nèi)培養(yǎng)2月后，肉眼觀察裸鼠背部植入部位情況；處死裸鼠，取出細(xì)胞支架復(fù)合物，行冰凍切片，掃描電鏡、組織學(xué)染色觀察細(xì)胞在支架上的生長(zhǎng)情況，行 II型膠原免疫組化染色。qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)支架中骨

3、髓間充質(zhì)干細(xì)胞的So x-9基因、II型膠原表達(dá)水平。
　　結(jié)果：（1）鏡下Sox-9基因修飾SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，在第3代開始出現(xiàn)衰老的形態(tài)表現(xiàn)；細(xì)胞接種支架后，倒置相差顯微鏡下、掃描電鏡、HE染色觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在支架上粘附良好。（2）細(xì)胞支架復(fù)合物體內(nèi)培養(yǎng)2月后，肉眼觀察在裸鼠皮下植入部位周圍無感染及炎癥反應(yīng)，細(xì)胞支架復(fù)合物呈楔形，與皮膚內(nèi)面愈合。II型膠原免疫組化染色陽性，qRT-PCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)側(cè)支架復(fù)合物